论文部分内容阅读
目的：从功能、形态及分子水平，探讨基于Fox01(FKHR)基因及有关信号通路，研究苦瓜提取物改善2型糖尿病（T2DM）动物模型ZDF大鼠的肌肉和肝脏的胰岛素抵抗（IR）作用机理。 方法：采用自发性T2DM动物模型：雄性ZDF大鼠18只，其中胖型12只，并按照随机数字表法选取6只为模型组，其余6只为苦瓜给药组，对其进行高脂饲料喂食。另6只瘦型ZDF大鼠作为正常对照组，喂以基础饲料。并对其进行持续6个月的治疗观察，其中苦瓜组给予400mg·kg-1·bw-1剂量进行灌胃，正常组和模型组给予10ml·kg-1·bw-1生理盐水进行灌胃。检测各组ZDF大鼠的体重、空腹血糖、随机血糖、口服糖耐量（OGTT）和胰岛素释放试验（ITT）检测并计算OGTT曲线下面积（AUC）；检测骨骼肌一些氧化应激因子：丙二醛（MDA）,过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）;检测ZDF大鼠肝脏甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷草转氨酶（AST）和其谷丙转氨酶（ALT）等生化指标；通过HE染色观察ZDF大鼠骨骼肌、肝脏组织及细胞结构；通过透射电镜观察其骨骼肌线粒体等超微结构；采用RT-PCR检测ZDF大鼠骨骼肌中PI3K/AKT/ Fox01mRNA的表达含量；WB（Western blot）检测观察苦瓜提取物对大鼠肝脏组织中P- Fox01/ Fox01/PEPCK/G6Pase蛋白含量的改变。 结果：与正常组ZDF大鼠体重相比较模型组大鼠体重增加较快，有明显差异；与模型组相比，苦瓜给药组大鼠的体重增加由快到慢，能够适当控制体重。与正常组相比，模型组大鼠的FBG,RBG,OGTT,ITT差异显著；与模型组相比，苦瓜提取物对改善ZDF大鼠的作用明显且AUC曲线下面积明显降低。与正常组相比，模型组大鼠的TC/TG/AST/ALT水平显著升高；与模型组相比，苦瓜给药组可以明显改善肝功。HE染色发现苦瓜给药组可以改善骨骼肌肌丝排列；改善大鼠肝脏脂肪堆积，改善肝细胞形态。电镜切片观察发现苦瓜给药组明显改善线粒体排列结构。real-time荧光定量PCR检测发现增加其可增加PI3K/AKT mRNA的表达含量，并且降低FoxO1mRNA含量。WB结果显示苦瓜给药组相对模型组FoxO1/PEPCK/G6Pase的蛋白含量明显降低，P- FoxO1含量增加。 结论：苦瓜提取物能够控制T2DM模型ZDF大鼠的体重、血糖、血脂水平；苦瓜提取物可促进T2DM模型ZDF大鼠信号通路PI3K/AKT/ Fox01作用，减轻IR；苦瓜提取物可改善T2DM模型ZDF大鼠体内一些氧化应激指标，起到抗氧化作用，可能与Fox01作用有关；苦瓜提取物可抑制T2DM模型ZDF大鼠Fox01/PEPCK/ G6Pase通路作用来减少肝脏的过度糖异生；苦瓜提取物可适当修复T2DM模型ZDF大鼠的骨骼肌和肝脏的细胞形态。