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目的:本研究通过模拟人肝癌细胞株(HepG2)和人肝癌耐药细胞株(HepG2/ADM)缺血再灌注过程,探讨缺血再灌注导致微环境改变对肝癌细胞耐药性的影响,为进一步探索新的途径逆转肝癌细胞多药耐药提供前期研究基础。方法:将人肝癌细胞株HepG2和人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM培养至对数生长期,两细胞株分别设立灌注组(HepG2灌注组:HC组;HepG2/ADM灌注组:HAC组)和缺血再灌注组(HepG2缺血再灌注组:HR组;HepG2/ADM缺血再灌注组:HAR组),其中灌注组用灌注液灌注8小时;缺血再灌注组用缺血液灌注4小时,再灌注液灌注4小时,模拟肝癌细胞缺血再灌注过程。倒置显微镜观察灌注组和缺血再灌注组的细胞形态变化,逆转录PCR半定量检测灌注组和缺血再灌注组多药耐药基因1(multidrug resistancegene-1,MDR1)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein-2,MRP2)mRNA的表达,Western blot法检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)蛋白的表达,MTT法检测阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)两种抗癌药物对灌注组和缺血再灌注组细胞生长抑制率的影响。数据均采用均数±标准差表示(x±s),使用SPSS17.0统计软件进行统计学处理,两样本均数的比较使用t检验,多个样本均数多重比较使用单因素方差分析(SNK法)。结果:(1)MDR1mRNA在HC组和HR组的相对表达量分别为0.322±0.036和0.447±0.051,两组比较具有显著差异(P<0.05),MDR1mRNA在HAC组和HAR组的相对表达量为0.458±0.056和0.450±0.043,两组比较无明显差异(P>0.05);MRP2mRNA在HC组和HR组的相对表达量分别为0.265±0.043和0.548±0.051,两组比较具有显著差异(P<0.05),MRP2mRNA在HAC组和HAR组的相对表达量为0.540±0.044和0.532±0.050,两组比较没有差异(P>0.05);(2)P-gp在HC组和HR组的相对表达量分别为0.222±0.025和0.327±0.045,两组比较具有显著差异(P<0.05),P-gp在HAC组和HAR组的相对表达量为0.492±0.055和0.539±0.062,两组比较无明显差异(P>0.05);LRP在HC组和HR组的相对表达量分别为0.339±0.064和0.157±0.038,两组比较具有显著差异(P<0.05),LRP在HAC组和HAR组的相对表达量为0.772±0.057和0.749±0.061,两组比较没有明显差异(P>0.05)。(3) MTT法表明ADM和5-FU对HR组细胞的生长抑制率较HC组减弱,具有显著差异(P<0.05);ADM和5-FU对HAR组细胞生长抑制率的影响较HAC组无明显差异(P>0.05)。结论:(1)缺血再灌注能诱导肝癌细胞HepG2表达多药耐药基因MDR1、MRP2和多药耐药相关蛋白P-gp、LRP。(2)经缺血再灌注后,肝癌细胞HepG2对ADM和5-FU的抗肿瘤作用产生抵抗。(3)缺血再灌注参与了肝癌细胞多药耐药性的形成。