采用GC-MS检测左归丸含药血清对高糖小鼠胚胎发育损伤作用的影响研究

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目的:研究添加高浓度葡萄糖的拟人输卵管培养液(human tubal fluid.HTF)对ICR小鼠早期胚胎(合子到囊胚期)体外发育的影响及同时添加左归丸含药血清干预下对其影响的作用,并根据囊胚期差异代谢物比较探讨左归丸可能的起效机制。方法:使用含0mmol/L,20mmol/L,40mmol/L,60mmol/L葡萄糖的HTF培养液,采用微滴法及CO2培养箱对ICR小鼠胚胎细胞进行体外培养120h,采用体视显微镜及荧光染色技术观察不同糖浓度下胚胎2-细胞率(24h)、囊胚率(120h)、囊胚细胞数(120h)的变化。选择选择显著抑制ICR小鼠早期胚胎发育的适宜葡萄糖浓度同时添加5%或10%左归丸含药血清体外作用于胚胎1-细胞,观察2-细胞率、囊胚率、囊胚细胞数的变化。采用GC-MS法、OPLS-DA模型、层次聚类对高糖囊胚期胚胎及左归丸干预的高糖囊胚期胚胎代谢化合物进行分析。结果:胚胎细胞在添加0mmol/L,20mmol/L葡萄糖的HTF培养基中可正常孵化、发育,在含40、60mmol/L葡萄糖的HTF培养基中发育受到明显损伤(P<0.05),浓度俞高,损伤程度俞大。5%或10%左归丸含药血清能够降低含40及60mmol/L葡萄糖的HIF培养基对胚胎发育的损伤作用(P<0.05)。采用气相色谱GC-MS检测技术代谢组方面结果显示:高糖组苯丙氨酸、琥珀酸、葡萄糖-1-磷酸、D-氨基葡萄糖-1-磷酸、6-脱氧-D-葡萄糖水平上调,而尿嘧啶、甘氨酸、枸橼酸水平的下调,左归丸含药血清组亚油酸、甘氨酸水平上调,甘露糖、花生四烯酸、β-氨基丙酸含量下降,所涉及的差异代谢通路:包括糖类代谢通路(淀粉和蔗糖代谢,半乳糖代谢);碳水化合物代谢(三羧酸循环);氨基酸代谢通路(苯丙氨酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,β-氨基丙酸);脂代谢通路(甘油酯代谢,亚油酸代谢)。结论:说明左归丸含药血清有助于改善高糖负荷所引起的胚胎发育停滞。在细胞形态学方面具有纠正高浓度葡萄糖引起的胚胎发育抑制的作用。说明左归丸对高浓度葡萄糖引起的胚胎发育损伤具有不仅仅止于形态学方面修复作用。高糖可能会引起胚胎能量代谢异常、最终代谢通路——三羧酸循环异常、蛋白质及DNA原料不足、脑发育异常、氧化能力增强等。左归丸具有抗氧化、调节免疫应答能力及降低免疫应答损伤、补充氨基酸原料、修复脑损伤。对高糖引起的胚胎损伤具有针对性的修复作用的同时具有增强抵抗力从而抵御其他损伤的作用。
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