多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocid,Pm）是一种革兰氏阴性短小杆菌,通常存在于动物的鼻腔、扁桃体、肺等部位,可广泛感染多种动物引起致病,包括猪肺疫、猪萎缩性鼻炎、兔巴氏杆菌病等疾病。目前,Pm引起的感染仍然是困扰畜禽养殖业的主要问题之一。为了预防和治疗病原感染,大量抗生素被应用到临床上,导致病原菌产生耐药性,甚至多重耐药菌株也随之出现。国内外对从患病动物分离的Pm耐药性调查结果显示,Pm的耐药情况较为严重,但对健康动物携带Pm的情况调查报道较少,因此,本实验对重庆市部分区县健康猪源和兔源Pm菌株的分子生物学特性、耐药表型和耐药基因等进行研究,为该地区Pm的流行病学和致病性研究提供基础数据,同时也为临床上巴氏杆菌病的诊断、防控提供参考依据。全文主要内容如下:1.多杀性巴氏杆菌的流行情况调查2019年8月至2020年12月,在重庆大足、北碚和铜梁等区县部分规模化养殖场、屠宰场,采集到健康猪、兔鼻拭子732份、肺脏组织241份。对采集样品以血平板（5%脱纤维绵羊血）作为选择性培养基进行Pm分离鉴定,对疑似菌进行Pm特异性基因kmt1扩增鉴定。从973份样品中共分离出49株Pm,其中30株猪源,19株兔源,分离率分别为3.7%和11.1%,总分离率为5.0%。应用多重PCR方法对分离的Pm进行荚膜和脂多糖分型:共鉴定出A型和D型两种荚膜基因型,A型是猪源和兔源Pm的优势基因型;所有分离菌只鉴定出L3和L6两种脂多糖基因型,兔源以L6型为主,猪源以L3型为主;荚膜:脂多糖的基因型组合猪源多表现为A:L3,兔源主要是A:L6。2.多杀性巴氏杆菌的药物敏感性和耐药基因研究参考CLSI M100版本的抗菌药物敏感性试验标准,采用纸片扩散法对分离的49株Pm进行29种抗生素药物的敏感性试验。结果表明,猪源和兔源Pm的耐药情况无明显差异。所有分离菌对β-内酰胺类、四环素类、喹诺酮类等药物表现敏感,对青霉素、丁胺卡那、链霉素、萘啶酸、复方新诺明、磺胺异噁唑、克林霉素和林可霉素共8种药物耐药,其中对磺胺异噁唑、克林霉素和林可霉素耐药率最高。分离菌的多重耐药从2～6种不等,最高同时耐6种抗菌药物来自猪源Pm。分离菌共存在着17种耐药谱,猪源Pm存在着10种不同的耐药谱,同时耐4种、5种药物的最多,常见的耐药谱为DA+MY+AK+SIZ;兔源Pm同时耐3种药物的情况较多,最常见的耐药谱为DA+MY+SIZ。结合耐药表型,通过PCR检测到与磺胺类和氨基糖苷类相关的耐药基因,每株分离菌至少含有2种及以上耐药基因;未检测出与林可酰胺类有关的耐药基因。对β-内酰胺类敏感菌株Pm 28测序结果分析,发现该菌株在第104位、第182位和第238位发生氨基酸替换,可能是Pm菌株可检出耐药基因但仍然对β-内酰胺类敏感的主要原因。3.多杀性巴氏杆菌的毒力基因检测和致病性研究通过PCR技术对49株Pm检测22种毒力基因（ptf A、fim A、hsf-1、hsf-2、pfh A、tad D、tox A、sod A、sod C、omp A、omp H、oma87、plp B、pm HAS、exb B、exb D、ton B、hgb A、hgb B、Fur、nan B和nan H）的携带情况。结果表明49株Pm中,有18种毒力基因的检出率为100%,所有菌株均不存在编码皮肤坏死毒素tox A基因,这也可能是分离菌并未引起带菌动物感染发病的关键。猪源和兔源分离菌株携带毒力基因的情况存在着一定差异,pfh A几乎不存在于兔源Pm中,在猪源Pm中阳性率高达95%以上;hgb B和nan B在猪源Pm中检出率为0,在兔源Pm中阳性率为100%。按照3.9×10~2 CFU/m L的剂量对小鼠进行致病性实验,结果表明:其中44株分离菌会致死小鼠,死亡小鼠心、肝、脾、肺和肾脏均出现了不同程度的病理变化,以肺脏最严重。