近年来随着一些药用植物资源和陆生资源的减少,具有水陆两栖独特生态习性的红树植物及其内生真菌已逐渐成为寻找先导化合物的新热点。真菌去乙酰环氧二烯(DAM)是从红树植物秋茄内生真菌拟茎点霉A123及其高产菌株拟茎点霉G818中分离到的重要次级代谢产物。它是含有氧桥的环二烯为骨架的结构十分新颖天然产物,且具有较好的抗肿瘤活性和AMPK激活活性,体外抗肿瘤活性检测发现其对口腔上皮癌、前列腺癌、宫颈癌、大肠癌等都具有较好的抑制作用,具有较好的开发前景。前期将野生型菌株拟茎点霉A123通过原生质体诱变结合基因组改组获得产量提高近300倍的高产菌株拟茎点霉G818,并通过构建DAM高低产菌株抑制性消减杂交文库,获得一条可能与其生物合成相关的差异PKS序列。以此序列为探针,杂交基因组文库后获得亚克隆测序,序列拼接获得两个聚酮合成基因(PKS1和PKS2)以及相关修饰基因组成一个50Kb左右的基因簇。该基因簇是否与DAM生物合成有关需要功能基因组学证实,由于DAM产生菌多核及基因簇长达50Kb,此前基因敲除和异源表达均未成功。本研究采用真菌RNA干扰技术,分别构建PKS1和PKS2的干扰载体,转化拟茎点霉G818并获得6个相应的干扰突变株(1-4、1-8、1-9)和(2-2、2-11、2-13),结果拟茎点霉G818及其转化空载体的突变株均具有较高的DAM产量,而PKS1和PKS2的6个阳性干扰突变株均检测不到DAM产量,进一步比较各菌株mRNA转录水平,结果拟茎点霉G818和转化空载体的菌株中PKS1和PKS2基因均具有较高的mRNA转录量,而PKSl和PKS2干扰所获得的6株突变菌株中几乎检测不到PKSl基因和PKS2基因的表达,其mRNA转录水平比菌株拟茎点霉G818下调20%-100%,转录水平与产物合成结果基本吻合。干扰研究结果证实PKS1和PKS2基因均参与DAM生物合成,结合前期在高产菌株中分离的化合物数据以及PKS1和PKS2连锁的相关基因,对DAM生物合成基因簇和反应途径有了比较清晰的了解,初步构建其生物合成过程。为这一结构新颖的活性化合物开发及丝状真菌分子育种、聚酮组合生物学研究,以及发酵产量调控和工艺优化奠定基础。