三疣梭子蟹EcR基因在蜕皮和卵巢发育过程中的表达分析

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为了研究蜕皮激素受体(EcR)在甲壳动物生长和生殖过程中的作用,采用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆得到了三疣梭子蟹Portunus trituberculatus蜕皮激素受体(PtEcR)的全长cDNA序列(GenBank登录号:KC354381),运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,分析该基因在不同组织、蜕皮时期和卵巢发育阶段的表达特征。结果表明,PtEcR cDNA全长2231bp,包含一个206bp的5’非编码区、一个756bp的3’非编码区,和一个1269bp的开放阅读框(ORF),共编码422个氨基酸。推导的PtEcR氨基酸序列与已公布的其他甲壳动物EcR进行比对,发现一致性为67%-97%,其与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)一致性最低,为67%;与拟穴青蟹(Scylla paramamosain)EcR氨基酸序列一致性最高,与其三种亚型的一致性分别为95%、95%和97%。系统进化树分析PtEcR与其它甲壳动物EcR聚为一支,而昆虫EcR聚为另一支。PtEcR在检测的10个三疣梭子蟹组织(表皮,性腺,肝胰腺,眼柄,大颚器,Y-器,胸神经节,心脏,肌肉)中均有表达,其中在Y-器(YO)表达量最高。在蜕皮周期中,自蜕皮后期至蜕皮前期D2亚期PtEcR在YO中的表达量一直较低;至蜕皮前期D3亚期和D4亚期,PtEcR表达量显著升高,这与血淋巴中20-羟基蜕皮酮(20E)浓度在D3/D4亚期显著升高相协同,表明PtEcR在三疣梭子蟹蜕皮过程中起着重要的作用。一次卵巢发育阶段,PtEcR在YO、卵巢(Ov)和肝胰腺(Hp)中的表达量自卵巢发育初期(Ⅰ期)逐渐升高至卵巢发育旺盛期(Ⅳ期达)到最高,卵巢发育成熟期(V期)下降;二次卵巢发育阶段,PtEcR在YO和肝胰腺中的表达量自卵巢快速发育期(Ⅱ期)逐渐升高至卵巢发育成熟(Ⅳ期)后达到最高;卵巢中,则在Ⅰ、Ⅲ期较低,Ⅱ、Ⅳ期较高,表明PtEcR可能参与卵巢发育和卵黄发生。
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