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目的：急性肺损伤（acute lung injury，ALI）/急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是指由心源性以外的各种肺内、外致病因素导致的急性、进行性呼吸衰竭。引起AIA/ARDS的原因或高危因素很多，可以分为肺内因素（直接因素，如重症肺炎）和肺外因素（间接因素，如败血症）。炎症反应、肺组织损伤和纤维化是ARDS主要的发病机制和病理改变，糖皮质激素（glucocorticoids，GCs）具有抑制炎症反应、减轻细胞因子对肺组织的损伤和抑制纤维化等作用，理论上来说，激素治疗ARDS应有较好的效果。但事实并非如此，临床发现不同诱因的ALI患者对激素治疗的反应存在较大差异。糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）表达水平的不同，可以影响GCs的疗效。这可能是导致激素治疗效果差异的机制之一。
因此，本研究复制了脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）及大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）诱导的急性肺损伤动物模型，比较两种动物模型中细胞因子TNF-α和IL-1β的含量、NF-κB P65和GR的表达水平及GCs干预治疗对两种动物模型中上述指标的影响以探讨不同诱因所致ALI的炎症机制和激素治疗效果的差异及其潜在机理，为临床选择性、合理性应用糖皮质激素治疗不同诱因引起的ARDS提供理论依据。
方法：健康雄性SD大鼠48只，随机分为6组：①NS组：尾静脉注射生理盐水1ml②LPS组：尾静脉注射LPS（8mg/kg）③E.coli组：气道内缓慢滴注大肠杆菌标准菌株悬液（5.0×109cfu/ml，3ml/kg）④NS+Dex组，⑤LPS+Dex组，⑥E.coli+Dex组，每组8只动物。④、⑤、⑥三组为激素干预组，造模后立即腹腔注射地塞米松（Dexamethasone，Dex）（2mg/kg）。
LPS，生理盐水造模4小时后，大肠杆菌造模24小时后取材测定相应指标。
10％水合氯醛腹腔注射麻醉（3ml/kg），股动脉放血收集血液，离心（3000rpm，4℃，10min），吸取上清，-80℃保存，检测血清中TNF-α、IL-1β的含量。开胸处死动物后，取右肺中叶，10％中性福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋HE染色，观察肺组织病理形态学变化并评分，石蜡包埋切片SP法染色，观察NF-κB P65及GR阳性细胞表达部位；取右肺下叶液氮冻存做蛋白印迹。经气管插管行左肺支气管肺泡灌洗，取支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveloar lavage fluid，BALF），离心（1200rpm，4℃，10min），吸取上清，-80℃保存，检测BALF中TNF-α、IL-1β的含量。细胞沉淀悬浮于200μl生理盐水中，进行白细胞计数。
结果：（1）LPS组和E.coli组BALF中细胞总数均高于NS组（分别为36.22±5.60，366.97±31.63 vs13.06±1.94，P<0.01），且E.coli组高于LPS组（P<0.01）。在LPS+Dex组和E.coli+Dex组BALF中细胞总数均有显著下降（分别为19.34±2.61 vs36.22±5.60和247.25±22.16 vs366.97±31.63.P<0.01）。（2）LPS组和E.coli组光镜下肺组织病理评分明显高于NS组（P<0.05），而两个肺损伤模型组之间无差别（15.38±1.06 vs15.88±1.73，P>0.05）。肺组织病理评分在LPS+Dex组显著低于LPS组（12.13±0.99 vs15.38±1.06，P<0.01），而E.coli+Dex组与E.coli组病理评分无统计学意义（14.25±1.75 vs15.88±1.73.P>0.05）。（3）LPS组和E.coli组NF-κB P65阳性细胞表达显著高于NS组（分别为34.08±3.82，36.33±4.05 vs3.11±1.10，P<0.01）。与LPS组相比，LPS+Dex组染色明显变浅，阳性反应明显减轻（26.14±3.91 vs34.08±3.82，P<0.01），而E.coli+Dex组与E.coli组相比染色及阳性反应无明显改变（35.10±4.22 vs36.33±4.05.P>0.05）。LPS组和E.coli组GR阳性细胞表达显著低于NS组（分别为20.80±0.88，18.06±1.67vs28.86±3.14，P<0.01）。与LPS组相比，LPS+Dex组阳性反应明显增高（24.58±2.67 vs20.80±0.88，P<0.01），而E.coli+Dex组与E.coli组相比染色及阳性反应无明显改变（17.49±2.69vs18.06±1.67，P>0.05）。（4）蛋白印迹结果显示，NS组NF-κBP65条带颜色与两模型组相比较浅，LPS模型组与相应的Dex治疗组相比颜色较深，E.coli模型组与相应的Dex治疗组相比条带颜色无明显变化。NS组GR条带颜色与两模型组相比较深，LPS模型组与相应的Dex治疗组相比颜色较浅，E.coli模型组与相应的Dex治疗组相比条带颜色无明显变化。（5）LPS组和E.coli组血清和BALF中TNF-α/及IL-1β含量显著高于NS组（P<0.01）。LPS+Dex组血清和BALF中TNF-α及IL-1β含量低于LPS组（P<0.05）。E.coli+Dex组血清和BALF中TNF-α含量及IL-1β含量与E.coli组相比无差别（P>0.05）。
结论：1.大鼠气道注射大肠杆菌标准菌株悬液可以造成肺内直接感染引起的ALI/ARDS模型。
2.肺内因素及肺外因素所致ALI/ARDS在肺组织NF-κB P65和GR表达水平及肺内与外周血细胞因子TNF-α、IL-1β水平方面均存在一定的差异，说明ALI/ARDS的炎症机制与致病因素是紧密相连的。
3.激素治疗肺内因素及肺外因素所致ALI/ARDS的疗效不同，激素能在一定程度上减轻LPS组的肺损伤程度，但对于E.coli组的治疗基本无效。这可能与两种模型的致病因素及发病机制不同有关。
因此，本研究复制了脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）及大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）诱导的急性肺损伤动物模型，比较两种动物模型中细胞因子TNF-α和IL-1β的含量、NF-κB P65和GR的表达水平及GCs干预治疗对两种动物模型中上述指标的影响以探讨不同诱因所致ALI的炎症机制和激素治疗效果的差异及其潜在机理，为临床选择性、合理性应用糖皮质激素治疗不同诱因引起的ARDS提供理论依据。
方法：健康雄性SD大鼠48只，随机分为6组：①NS组：尾静脉注射生理盐水1ml②LPS组：尾静脉注射LPS（8mg/kg）③E.coli组：气道内缓慢滴注大肠杆菌标准菌株悬液（5.0×109cfu/ml，3ml/kg）④NS+Dex组，⑤LPS+Dex组，⑥E.coli+Dex组，每组8只动物。④、⑤、⑥三组为激素干预组，造模后立即腹腔注射地塞米松（Dexamethasone，Dex）（2mg/kg）。
LPS，生理盐水造模4小时后，大肠杆菌造模24小时后取材测定相应指标。
10％水合氯醛腹腔注射麻醉（3ml/kg），股动脉放血收集血液，离心（3000rpm，4℃，10min），吸取上清，-80℃保存，检测血清中TNF-α、IL-1β的含量。开胸处死动物后，取右肺中叶，10％中性福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋HE染色，观察肺组织病理形态学变化并评分，石蜡包埋切片SP法染色，观察NF-κB P65及GR阳性细胞表达部位；取右肺下叶液氮冻存做蛋白印迹。经气管插管行左肺支气管肺泡灌洗，取支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveloar lavage fluid，BALF），离心（1200rpm，4℃，10min），吸取上清，-80℃保存，检测BALF中TNF-α、IL-1β的含量。细胞沉淀悬浮于200μl生理盐水中，进行白细胞计数。
结果：（1）LPS组和E.coli组BALF中细胞总数均高于NS组（分别为36.22±5.60，366.97±31.63 vs13.06±1.94，P<0.01），且E.coli组高于LPS组（P<0.01）。在LPS+Dex组和E.coli+Dex组BALF中细胞总数均有显著下降（分别为19.34±2.61 vs36.22±5.60和247.25±22.16 vs366.97±31.63.P<0.01）。（2）LPS组和E.coli组光镜下肺组织病理评分明显高于NS组（P<0.05），而两个肺损伤模型组之间无差别（15.38±1.06 vs15.88±1.73，P>0.05）。肺组织病理评分在LPS+Dex组显著低于LPS组（12.13±0.99 vs15.38±1.06，P<0.01），而E.coli+Dex组与E.coli组病理评分无统计学意义（14.25±1.75 vs15.88±1.73.P>0.05）。（3）LPS组和E.coli组NF-κB P65阳性细胞表达显著高于NS组（分别为34.08±3.82，36.33±4.05 vs3.11±1.10，P<0.01）。与LPS组相比，LPS+Dex组染色明显变浅，阳性反应明显减轻（26.14±3.91 vs34.08±3.82，P<0.01），而E.coli+Dex组与E.coli组相比染色及阳性反应无明显改变（35.10±4.22 vs36.33±4.05.P>0.05）。LPS组和E.coli组GR阳性细胞表达显著低于NS组（分别为20.80±0.88，18.06±1.67vs28.86±3.14，P<0.01）。与LPS组相比，LPS+Dex组阳性反应明显增高（24.58±2.67 vs20.80±0.88，P<0.01），而E.coli+Dex组与E.coli组相比染色及阳性反应无明显改变（17.49±2.69vs18.06±1.67，P>0.05）。（4）蛋白印迹结果显示，NS组NF-κBP65条带颜色与两模型组相比较浅，LPS模型组与相应的Dex治疗组相比颜色较深，E.coli模型组与相应的Dex治疗组相比条带颜色无明显变化。NS组GR条带颜色与两模型组相比较深，LPS模型组与相应的Dex治疗组相比颜色较浅，E.coli模型组与相应的Dex治疗组相比条带颜色无明显变化。（5）LPS组和E.coli组血清和BALF中TNF-α/及IL-1β含量显著高于NS组（P<0.01）。LPS+Dex组血清和BALF中TNF-α及IL-1β含量低于LPS组（P<0.05）。E.coli+Dex组血清和BALF中TNF-α含量及IL-1β含量与E.coli组相比无差别（P>0.05）。
结论：1.大鼠气道注射大肠杆菌标准菌株悬液可以造成肺内直接感染引起的ALI/ARDS模型。
2.肺内因素及肺外因素所致ALI/ARDS在肺组织NF-κB P65和GR表达水平及肺内与外周血细胞因子TNF-α、IL-1β水平方面均存在一定的差异，说明ALI/ARDS的炎症机制与致病因素是紧密相连的。
3.激素治疗肺内因素及肺外因素所致ALI/ARDS的疗效不同，激素能在一定程度上减轻LPS组的肺损伤程度，但对于E.coli组的治疗基本无效。这可能与两种模型的致病因素及发病机制不同有关。