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生物柴油具有可生物降解、低毒、低排放特性,是最有前景的化石能源替代燃料,但原料油供应不足成为限制生物柴油发展的瓶颈。微生物油脂是生物柴油的潜在理想原料油,本论文拟从自然界中筛选油脂高产真菌,并对其油脂发酵工艺进行优化,取得的主要研究结果如下:(1)从牧场土壤筛选获得一株油脂含量为30.2%的真菌,其脂肪酸组份主要为油酸(46.26%)、棕榈酸(22.58%)、γ-亚麻酸(13.68%)和亚油酸(6.68%),与植物油脂肪酸组成相似,碱法制备生物柴油得率89.6%,且其生物柴油特性指标基本符合国际生物柴油生产标准,表明该菌株可作为原料油生产生物柴油。(2)根据形态学、生理生化特征及18S rDNA序列分析,对筛得的菌株进行分类鉴定。结果表明,该菌株的形态和生理特征与毛霉属真菌相似,且其18S rDNA序列与Mucor sp.EA 2010b stain ERRL的18S rDNA序列相似度为99%,因此,将其归属于毛霉,并命名为Mucor sp.RBB 1-5。(3)采用单因子实验和响应面分析优化了Mucor sp.RBB 1-5的油脂发酵工艺,发现蛋白胨较酵母粉更有利于油脂积累,其最佳培养基配方为:葡萄糖103.32 g/L,蛋白胨3.21 g/L,豆粕粉蛋白浓度3.29 g/L,KNO3 3.0 g/L,Na2HPO4 2.0 g/L,MgSO4·7H2O1.0 g/L;最佳培养条件为:初始pH 6.0,装液量50 m L/250 mL,温度28℃,培养时间5 d。在优化发酵条件下,油脂产量达10.38 g/L,相比未优化之前提高2.15倍。(4)研究了蛋白胨和酵母粉对油脂发酵的影响机制。通过分析氮源对三羧酸循环(TCA)途径中苹果酸酶(ME)活性和戊糖磷酸(PP)途径中葡萄糖-6磷酸脱氢酶(G6PDH)活性的影响,探讨氮源对油脂发酵的影响机制。苹果酸酶(ME)酶活与油脂变化趋势一致,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)活性与油脂变化无明显相关性,蛋白胨为氮源时ME酶活性高于酵母粉组,表明蛋白胨主要通过影响TCA途径,增强ME活性,进而增加还原力NADPH的供应来提高油脂产量。