JNK介导低频低强度超声联合姜黄素逆转脑胶质瘤细胞多药耐药蛋白P-gp表达的研究

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目的:本实验的目的是为了研究低频低强度超声(low-frequency and intensity ultrasound)与姜黄素单独和联合使用对U87细胞增殖抑制以及对JNK和P-gp蛋白表达的影响,并初步探讨JNK是否可作为逆转脑胶质瘤多药耐药蛋白P-gp靶点的依据。方法:本次实验采用脑胶质瘤U87细胞,培养细胞至对数期后,应用于实验。而后依次采用不同强度的低频超声(3.0、50.4、83.4、142、290、474m W/cm~2)及不同浓度(5、10、15、20umol/L)姜黄素处理U87细胞,用检测细胞抑制和增殖作用的CCK-8,选择出适当的联合作用条件,也就是强度为83.4m W/cm~2的低频低强度超声以及浓度为15umol/L的姜黄素;将两者联合作用以及低频低强度超声、姜黄素各自分别作用各为一组实验组,并加上对照组,共四组实验组,应用CCK-8测试细胞的的增殖或抑制,Western-blot测试JNK和P-gp的蛋白表达水平的变化。进一步应用JNK特异性抑制剂SP600125后,Western-blot观察P-gp蛋白表达的变化情况。本次实验进行单因素方差分析采用Graph Pad Prism绘图软件以及SPSS 21.0统计学软件,比较各组之间有没有统计学意义。结果:1、用浓度不同的姜黄素处理U87细胞,作用时间24h后,U87细胞呈现明显的抑制效果,并伴随着浓度的增加,其抑制的效果越明显,具有统计学意义(P<0.05);2、应用不同强度的低频超声处理U87细胞,辐照时间30s后,发现其对U87细胞整体产生抑制作用,然而相对于其他作用强度,强度为83.4m W/cm~2的低频超声其抑制作用更加明显,具有统计学意义(P<0.05);3、联合应用姜黄素(15 umol/L)及低频低强度超声(83.4m W/cm~2)后,能够明显抑制U87细胞增殖,降低P-gp及JNK蛋白水平的表达,其联合组作用明显强于各单独组,差异有统计学意义(P<0.05);4、应用JNK特异性抑制剂SP600125后,可显著下调P-gp蛋白的表达。结论:低频低强度超声和姜黄素的联合应用比低频低强度超声和姜黄素的单独应用对U87细胞有更明显的增殖抑制作用,以及对P-gp及JNK的蛋白水平的表达有显著的下调作用。下调JNK蛋白的表达水平后,P-gp蛋白水平的表达也显著下调。
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