致病细菌的耐药性问题越来越受到人类的重视,亟待寻找有效解决途径。天然抗生素的发现及其衍生物的合成,在对抗致病细菌感染中起到了不可估量的作用。目前临床上使用的多肽类药物,例如短杆菌肽、万古霉素、多粘菌素E和达托霉素等均显示出较好的药效,其结构多为环状,有较好的透膜活性和稳定性。这些药物大多来源于陆生生物,然而,最近的研究结果显示,海洋生物体中同样存在着有效的抗菌成份。最近从中国南海深海放线菌Streptomyces scopuliridis SCSIO ZJ46的代谢产物中提取的一个由cyclo(-[Trp-Leu-D-Leu-Val-Asn-Gly]-)组成的六环肽,相对于Desotamide家族的另外几种环肽而言,Desotamide B抗菌范围更广,对耐甲氧西林表皮葡萄球菌具有良好的抑制作用,对哺乳动物的血细胞毒性较小,因此有利于抗菌药物的研发。因此,本课题主要围绕Desotamide B开展了如下的研究:(1)首先以多肽固相合成的方法优化合成Desotamide B,摸索出一套更有利于环肽合成的路线与方法,用以提高其固相合成的产率,为进一的研究工作铺平道路。(2)其次以上述方法为基础,结合丙氨酸扫描法,继续优化合成Desotamide B的另外6种衍生物抗菌肽,以期获得Desotamide B结构中特殊的活性位点,用于探究其抗菌机理。(3)最后针对上述7种目标化合物,选择肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌对其进行体外抑菌活性实验的验证,为进一步研发抗革兰氏阳性菌的药物奠定了基础。本课题研究工作的主要成果有以下几点:(1)在直链肽合成中,通过在氨基酸连接前,将所需的氨基酸在DIPEA的二氯甲烷溶液中活化1 h,成功的提高了直链肽的合成纯度,达到了86.3%,可以不用高效液相色谱纯化也可以直接用于下一步实验。(2)在将已经环合的直链肽从反应的环合体系中分离时,采用高效液相色谱分离纯化的收率为30.6%,采用GE Healthcare Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱进行分离纯化的收率为68.4%,两者对比,证明了采用葡聚糖凝胶柱对从环合体系中分离带有保护基的环肽的分离远高于使用高效液相色谱的分离效率。(3)选择肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、两种枯草芽孢杆菌4种革兰氏阳性菌对7种目标化合物进行体外抑菌实验和溶血活性实验实验,结果表明,衍生物Desotamide B-1对上述4种革兰氏阳性菌的最小抑菌浓度MIC50分别为8±1,6±1,10±2,11±1。通过治疗指数(最小溶血浓度/最小抑菌浓度),证实了Desotamide B结构上的特定氨基酸残基为天冬酰胺。综上所述,本课题成功探索出一条环肽合成的优化方法,为今后环肽的合成提供了参考价值,同时发现了环肽Desotamide B结构上的特殊位置,为进一步对其进行改造以期寻找出新型的抗菌药物奠定了基础。