脑型疟(cerebral malaria，CM)是恶性疟原虫感染最严重的致死性并发症，病死率高达20％～50％，约占恶性疟死亡人数的50％。我国北纬33°以南是恶性疟流行区，主要流行在海南省及云南省，CM时有发生，严重威胁着当地人民的生命和健康。由于CM发病机制至今尚不完全清楚，给其防治带来许多困难，因此，对CM发病机理的研究具有重要意义。 由于受伦理学限制，在人体研究CM有诸多困难，建立理想的CM动物模型成为研究其发病机制的重要途径和手段。小鼠感染鼠疟原虫后可发生CM，其病变和临床表现与人CM十分相似，据此可以建立动物模型研究CM。 肿瘤坏死因子-α(tumer necrosis factor-α，TNF-α)主要是由血液及组织中的巨噬细胞产生的一种细胞因子，近年来普郑州大学2002年硕士研究生论文 肿瘤坏死因子。与一氧化氮在脑型疟发病中的作用遍认为其在CM发病中具有重要作用，但对脑组织中TN’FJ的检测未见相关报道。一氧化氮＊itric oxide，NO）为一种化学性质十分活泼的气体小分子，具有广泛而复杂的生物学功能，体内的NO由一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）催化卜精氨酸反应生成。目前推测1’－uwJ可能是通过NO而引起CM，但没有相关的实验证据。 本实验采用伯氏疟原虫K173株（Plasmodiunm beryheiK173）感染C57BL历J ／J’鼠，建立CM动物模型，观察血清及脑组织中 TN’FJNO及 NOS在 CM发病过程中的含量变化，同时观察n’NF－。合成抑制剂地塞米松（dexamethasone）及NO合成抑用剂 L．硝基精氨酸（N－flitfo－L－。rgifliflC，L－N’NA）对血清和脑组织中T：NF川，NO浓度的影响及其与CM发病的关系，为研究CM的发病机制，探索新的防治方法提供基础资料和实验依据。 材料和方法 雌性C57BL／6J小鼠100只，6～8周龄，清洁 级，随机分为5组，每组20只。第1组为正常对照，腹腔注射生理盐水；第2组为感染对照，腹腔注射感染约氏疟原虫By265；第3组为CM模型，腹腔注射感染伯氏疟原虫K173；第4组为地塞米松 2郑州大学200二年硕士研究生论文 肿瘤坏死因子。与一氧化氮在脑型疟发病中的作用组，腹腔注射感染伯氏疟原虫以，并于感染前一天在饮水中加入地塞米松，浓度为 10mg／L；第 5组为 L－NNA组，腹腔注射感染伯氏疟原虫K173，从感染当天开始每只每天腹腔注射25g／L L－NNA溶液0．Zml。各组小鼠均于感染后第 5天随机抽取10只，摘眼球采血，分离血清，采血后处死取脑组织做组织匀浆。CM模型组小鼠于CM发病时采血，取脑组织匀浆，各组其他小鼠于感染后第 10天采血，取脑组织。用 ELISA法测血清J组织匀浆上清液中 TNF川含量，化学法测 NO和 NOS。加热干燥法测脑组织含水量。另取C57BL历J小鼠40只，随机分为 4组，每组 10只，均感染伯氏疟原虫，第 1组为 CM模型组；第 2组从感染前一天喂含地塞米松 10 mg／L的饮水；第3组小鼠自感染当天开始每天服腹腔注射t－wwrtsmg；第4组鼠在感染后第 8天每只腹腔注射 LPS p g。观察各组小鼠 CM发病情况及感染后生存时间。实验数据用SPSS软件进行统计学处理，统计方法采用方差分析，以Q刃刀5 为检验水准，实验结果以均数士标准差表示 结果 l、实验小鼠感染疟原虫后发病情况：CM模型组小鼠均发生 CM，发病时间在感染后 9叫 天，地塞米松组小鼠、L－NNA 三郑州大学2002年硕士研究生论文 肿瘤坏死因子。与一氧化氮在脑型疟发病中的作用组小鼠及感染对照组小鼠至感染后第 10大均未发生 CM。 2、CM模型组小鼠发病时与感染后第5天比较：小鼠CM发病时脑组织，血清’v’viw－Q、NO、NOS及脑组织含水量均高于感染第5大，差别有统计学意义o刃＊人 3、CM模型组与正常对照组比较：小鼠CM发病时和感染后第5天脑组织，血清TNF－Q、NO、NOS，脑组织含水量均高于同时间的正常对照组小鼠，差别有统计学意义0＜0刀1〕 4、CM模型组与感染对照组比较：CM模型组小鼠发病时及感染后第5天脑组织，血清TNF－a、NO、NOS，脑组织含水量均高于同时间的感染对照组小鼠，差别有统计学意义 （P＜0刀l）。 5、地塞米松组与＊M模型组比较：地塞米松组小鼠感染后第 10天及第 5天与同时间 CM模型组比较，脑组织，血清TNFJ，脑组织含水量均明显下降，差别有统计学意义 （P1刀1人 脑组织和血清 ＊O，＊OS 变化有统计学意义 0＜0刀引。 6、L－NNA组与CM模型组比较：脑组织，血清NO、NOS，脑组织含水量均显著性降低，差别有统计学意义p＜0刀1人T’iv’－Q含量变化无统计学意义瞩列．05卜 4郑州大学200二年硕士研究生论文 肿瘤坏死因子。与一氧化氮在脑型疟发病中的作用 7、小鼠感染后生存?