盐胁迫下转录因子BvM14-GAI功能研究

来源 :黑龙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huangguohao123
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甜菜M14品系是利用二倍体栽培甜菜(Beta vulgaris L.)与四倍体野生白花甜菜(B.corolliflora Zoss.)杂交及回交获得的甜菜单体附加系。相关研究已经证实,甜菜M14品系是具有优良性状的特殊种质资源。转录因子在植物应答逆境胁迫过程中发挥着重要的作用,GAI蛋白是植物转录因子家族的重要一员。实验室前期建立盐胁迫下甜菜M14品系根、叶转录组数据库,发现在Na Cl处理下BvM14-GAI基因上调表达。虽然许多植物的GAI基因序列已经被克隆,但甜菜中开展GAI基因的研究还未见报道。同时,目前GAI基因研究主要集中在光响应机制领域,而GAI基因响应耐盐机制研究报道较少。本研究开展的甜菜M14品系BvM14-GAI基因功能研究,不仅对GAI基因响应非生物胁迫的功能领域进行了拓展,而且对阐明甜菜M14品系的耐盐分子机制和培育耐盐作物品系都具有重要的研究价值。(1)通过PCR技术获得BvM14-GAI基因c DNA全长序列,生物信息学分析显示BvM14-GAI基因开放阅读框为1824 bp(包括终止密码子),编码607个氨基酸,理论分子量为66 k Da,等电点为5.37;蛋白多重序列比对和系统进化树分析显示BvM14-GAI蛋白与菠菜(Spinacia oleracea L.)和藜麦(Chenopodium quinoa Willd.)中GAI蛋白亲缘关系最近;结构域分析BvM14-GAI蛋白具有GRAS和DELLA的结构域,亚细胞定位预测显示定位在细胞核。(2)采用实时荧光定量PCR技术,研究BvM14-GAI基因的根和叶组织特异性和在盐胁迫下的诱导表达情况。结果显示,BvM14-GAI基因在甜菜M14品系根和叶的表达量存在差异,其叶中的表达量是根的10.18倍。200 m M Na Cl处理的BvM14-GAI基因在根中持续上调表达,叶中12 h表达量最高。(3)利用酵母转录自激活试验对BvM14-GAI基因的转录自激活活性进行了分析,结果表明BvM14-GAI基因具有转录自激活活性。(4)构建了BvM14-GAI-e YFP载体,瞬时转化烟草,共聚焦显微镜观察,结果显示BvM14-GAI在细胞核中表达。(5)构建了BvM14-GAI基因的植物表达载体,利用农杆菌介导的花序浸染法转化拟南芥野生型拟南芥和突变体,通过对150 m M Na Cl胁迫下异源表达和异源互补拟南芥植株的表型分析和生理生化水平检测,结果显示:未胁迫处理时,转基因植株相比对照组根长显著变短,干重和鲜重显著降低,说明BvM14-GAI为生长负调控因子;胁迫处理后,转基因植株与对照植株的根长、干重、鲜重由差异显著变为差异不显著,SOD和POD酶活性及甜菜碱的含量显著增加,提高了转基因植株的耐盐性。
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