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用蛋白的浓度与纯度为指标,比较研究了硫酸铵沉淀加凝胶层析法和高盐低pH条件下透析法两种技术路线分离纯化β-乳球蛋白的效果;以β-乳球蛋白水解后的ACE抑制率为指标,对胰蛋白酶酶解β-乳球蛋白的条件进行优化;用阳离子交换树脂和大孔树脂DA201-C对β-乳球蛋白的胰蛋白酶酶解液进行脱盐处理,并选用Sephadex G-25和Sephadex G-15串联分离得β-乳球蛋白源ACE抑制肽。1.硫酸铵沉淀加凝胶层析法分离β-乳球蛋白。以乳清粉为原料,用70%硫酸铵沉淀初步分离乳清蛋白,再选用SephadexG-50凝胶层析柱在pH6.8的0.2mol/L磷酸盐缓冲液条件下以1.0rpm的洗脱速度洗脱收集目标峰。结果表明:硫酸铵沉淀加凝胶层析法所得β-乳球蛋白浓度为1mg/ml、纯度﹥90%。2.高盐低pH条件下透析法分离β-乳球蛋白。以乳清粉为原料,选用7%的NaCl在pH为2的条件下初步沉淀分离乳清蛋白,再用高速离心机在10000×g重力下离心分离20min,最后用分子截量为14000Da的透析袋放于30倍体积的蒸馏水中静置20小时,收集透析袋中的溶液。结果表明:高盐低pH条件下透析法所得β-乳球蛋白浓度为11mg/ml、纯度达90%左右。3.制备β-乳球蛋白源ACE抑制生物活性肽的酶解方式和条件优化。采用胰蛋白酶,中性蛋白酶,胃蛋白酶水解β-乳球蛋白制备ACE抑制肽,通过体外检测法测定其ACE抑制率。结果表明,胰蛋白酶水解物的ACE抑制率最大。采用三因素二次旋转正交试验对胰蛋白酶水解β-乳球蛋白的水解条件进行优化,研究了底物浓度、温度、酶与底物的质量比对ACE抑制率的影响,建立了回归方程:Y=50.62-2.33X1-1.97X2+5.81X3-3.36X2X3-6.56X22-1.96X32,分析了各因素对ACE抑制率的影响,确定了最优的水解条件为:水解温度40℃,底物质量浓度为60g/L,酶与底物的质量比为3%。在胰蛋白酶最优的水解条件下酶解,水解6h时水解物ACE抑制率最大。4.β-乳球蛋白源ACE抑制生物活性肽的分离纯化。试验首先选择阳离子交换树脂和大孔树脂DA201-C对具有较高ACE抑制活性的β-乳球蛋白源活性肽进行脱盐。结果表明:阳离子交换树脂脱盐率86.67%,大孔树脂DA201-C脱盐率83.33%。但大孔树脂DA201-C脱盐处理后的水解物ACE抑制活性提高了约50%。因此,大孔树脂DA201-C为β-乳球蛋白水解物比较理想的脱盐方法;选择具有分子筛作用的Sephadex G-25和Sephadex G-15串联分离具有较高ACE抑制活性的β-乳球蛋白源活性肽。在洗脱流速为0.7ml/min时,选用0.01mol/L、0.03mol/L、0.06mol/L三种不同离子强度的磷酸盐缓冲液进行洗脱分离,筛选出能够较好分离β-乳球蛋白源ACE抑制肽的条件。结果表明:0.03mol/L离子强度的pH8.3的磷酸盐缓冲液进行洗脱,可从水解物中分离得到4个组分峰,其第4组分峰对ACE的抑制活性最大,抑制率为87.54%。