【摘 要】
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目的探讨lncRNA-AK149641对肥大细胞分泌功能的影响及作用机制。方法1)构建哮喘小鼠模型,RT-PCR的方法检测lncRNA-AK149641的表达水平。2)提取小鼠肺、心、肝、脾、肾、胃和骨骼肌等不同部位的组织,RT-PCR的方法检测lncRNA-AK149641的组织表达规律。3)将P815细胞分为下调对照组,AK149641下调组(感染慢病毒载体),LPS刺激组,LPS刺激+AK1
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目的探讨lncRNA-AK149641对肥大细胞分泌功能的影响及作用机制。方法1)构建哮喘小鼠模型,RT-PCR的方法检测lncRNA-AK149641的表达水平。2)提取小鼠肺、心、肝、脾、肾、胃和骨骼肌等不同部位的组织,RT-PCR的方法检测lncRNA-AK149641的组织表达规律。3)将P815细胞分为下调对照组,AK149641下调组(感染慢病毒载体),LPS刺激组,LPS刺激+AK149641下调组,采用ELISA检测细胞上清中IL-6和TNF-α的含量变化。4)应用基因芯片技术检测下调lncRNA-AK149641后肥大细胞中相关信号通路分子的影响。5)应用核质分离的技术,检测lncRNA-AK149641的相对表达来进行亚细胞定位。6)EMSA实验检测NF-κB的变化,Western Blot技术检测MyD88和磷酸化NF-κBp65蛋白表达水平的变化。结果1)哮喘小鼠的模型显示:lncRNA-AK149641在对照小鼠及哮喘小鼠肺中的表达量分别为 1.00±0.15、1.84±0.71(P<0.05),表明 lncRNA-AK149641 在哮喘小鼠肺组织中表达上调。2)小鼠不同组织的定量结果表明lncRNA-AK149641在肺脏组织中特异性高表达,表达量是其他的4-5倍(P<0.05)。3)在LPS刺激引起的肥大细胞分泌过程中,下调lncRNA-AK149641可使细胞上清中IL-6和TNF-α的含量减少,差异有统计学意义。4)基因芯片分析显示下调lncRNA-AK149641后差异表达的基因主要涉及炎症反应。5)核质分离实验提示lncRNA-AK149641在细胞核内的表达水平远高于细胞质,提示lncRNA-AK149641可能在基因转录水平发挥作用。6)EMSA实验显示下调lncRNA-AK149641可抑制NF-κB的表达,而Western Blot结果也证实了在LPS刺激引起的肥大细胞分泌过程中,lncRNA-AK149641可能通过NF-κB通路发挥了作用。结论下调lncRNA-AK149641可使小鼠源性肥大细胞分泌IL-6和TNF-α降低,而lncRNA-AK149641可能通过靶向NF-κB来调节P815分泌IL-6和TNF-α。
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