海水池塘养殖净水芽孢杆菌的筛选、生物学特性及其应用研究

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有机物污染、氨氮、亚硝态氮积累是池塘养殖水体恶化,鱼虾病害发生和品质下降的主要诱因。利用水体有益微生物实施生物修复是目前研究与开发的热点,筛选获得净水功能和制剂生产性能优良的优势芽孢杆菌菌株或其组合是创制高效微生态净水产品的关键。从海水池塘底泥样品中分离、纯化得到228株芽孢杆菌,经耐盐性、降解有机物、氨氮、亚硝酸盐氮能力的筛选实验,获得两株优势目的菌株—芽孢杆菌T301和T905。在模拟淡水和海水中,当氨氮、亚硝态氮初始浓度分别为20mg/L和40mg/L时,4天后,菌株T301对氨氮的降解率分别为55.18%和52.00%,对亚硝酸盐氮的降解率分别为55.95%和51.52%。菌株T905对氨氮的降解率分别为35.25%和36.53%,对亚硝酸盐氮的降解率分别为72.10%和74.17%。根据形态学特征和生理生化特性结果,依据《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰氏细菌鉴定手册》将T301和T905鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株安全性试验结果表明,两株菌对小鼠和南美对虾毒性为实属无毒。对目的菌株的生物学特性研究表明,菌株T301和T905可以利用葡萄糖、淀粉、乳糖、甘露醇、蔗糖等多种碳源;蛋白胨、酵母膏、牛肉膏等有机氮源比无机氮源更利于菌体的生长;t检验结果表明,磷酸酸盐缓冲液对枯草芽孢杆菌T301和T905生长的影响显著(P<0.01),其它无机盐的影响不显著(P>0.05)。菌株T301和T905的适宜生长条件与净水条件一致,适宜温度为22~38℃,pa为6~8.5,其生长和净水作用受盐浓度的影响不显著,可同时用于淡水和海水养殖水体的净化。添加物对T301和T905净水效果的影响研究结果表明,葡萄糖、淀粉等碳源可提高净水效果,这可能与养殖水体中含氮有机物含量高,而碳源相对缺乏,限制了菌株生长有关。提示,在实际生产应用时可以添加适当碳源,以提高净水效果。进行了菌株配伍实验,两株菌复合使用7天后COD降解率达68.90%,氨氮降解率达63.09%,亚硝酸盐氮降解率达72.76%,结果表明,使用复合菌株可显著提高COD降解率,能弥补单独使用T301亚硝酸盐氮降解率低及单独使用T905氨氮降解率低的缺点。两株菌配合可以实现优势互补,优于单一菌株的净水效果。将复合芽孢杆菌制剂应用到对虾海水养殖池塘,第、5天时试验池氨氮和亚硝酸盐氮在达到了检测限以下,7天时COD相对降解率达64.41%。实验过程中,试验池溶解氧波动较小(5.01~5.81)且达5mg/L以上,pH值波动也较小(7.54~7.96)。这说明使用复合芽孢杆菌制剂能显著降低养殖池的COD、氨氮、亚硝酸盐氮等污染物浓度,稳定养殖水体的溶解氧和pH值。试验池水质各项指标均优于未加芽孢杆菌制剂的对照池,达到良好水质指标。以上试验结果表明,由枯草芽孢杆菌T301和T905组成的复合菌株具有较好的净水功能和广阔的应用前景。
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