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目的:炎症可以通过激活NF-κB信号通路抑制PP2Ac促进胰腺癌的发生发展,但是PP2Ac下游涉及的分子事件尚不清楚。本研究拟探讨炎症通过抑制PP2Ac调控胰腺癌生长转移的相关分子机制,期望为胰腺癌的基因诊断和基因治疗提供有效靶标。方法:1.人胰腺癌细胞PANC-1分别经巨噬细胞条件培养基(macrophage conditioned medium,MCM)、蛋白磷酸酶 2A(protein phosphatase 2A,PP2A)抑制剂如冈田酸(okadaic acid,OA)、斑蝥素(cantharidin,CAN)以及干扰 PP2A 慢病毒(RNAi(PP2A))处理,应用转录组高通量测序技术检测MCM处理组和对照组基因mRNA表达量的差异,应用基因芯片技术(Microarray技术)检测OA、CAN以及RNAi(PP2A)处理组和对照组全基因组mRNA表达量的差异。2.构建PANC-1 Tet-On PP2Acα表达调控系统的细胞株,经MCM和多西环素(doxycycline,DOX)处理细胞后,应用real-time PCR技术和western blot技术检测F3表达量的差异。3.构建shRNA慢病毒介导的F3基因干扰的人胰腺癌细胞系,即PANC-1 F3-shRNA细胞系,研究干扰F3后对PANC-1生物学行为的影响及其相关的信号通路。4.应用Microarray技术检测PANC-1 F3-shRNA细胞全基因组mRNA表达量的差异,同时应用 Funrich 和 Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)在线软件进行 PANC-1 F3-shRNA 细胞下游差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)的功能和通路富集分析。5.应用MTT比色法、平板克隆实验检测F3对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的影响;应用细胞划痕实验检测F3对人胰腺癌细胞PANC-1迁移能力的影响;应用细胞粘附实验检测F3对人胰腺癌细胞PANC-1粘附能力的影响。6.应用Microarray技术检测F3对调控人胰腺癌细胞PANC-1生长转移基因mRNA表达的影响。7.应用Venn分析寻找MCM抑制PP2Ac上调F3表达后其下游可能调控胰腺癌生长转移的基因。结果:1.MCM、PP2A抑制剂(OA、CAN)以及干扰PP2A慢病毒分别处理人胰腺癌细胞PANC-1,对F3的表达均具有上调作用。2.在人胰腺癌细胞PANC-1中,PP2Ac过表达明显削弱MCM对F3表达的上调作用。3.成功构建人胰腺癌细胞PANC-1 shRNA慢病毒介导的F3基因干扰细胞系。4.PANC-1 F3-shRNA全基因组表达谱芯片结果显示:有869个基因表达上调,1180个基因表达下调。对DEGs进行生物信息学分析,使用Funrich分析结果显示:DEGs在生物学进程方面主要富集在信号转导和细胞通讯等;在细胞组分方面主要富集在细胞核和细胞外的空间等;在分子功能方面主要富集在转录调节剂活性以及转录因子活性等。使用KEGG分析结果显示:DEGs主要参与Ⅰ型单纯疱疹病毒感染、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、人类T细胞白血病病毒感染、EB病毒感染、粘着斑、病毒致癌作用以及癌症中的转录错误调节等。5.干扰F3能够抑制人胰腺癌细胞PANC-1的增殖、迁移和粘附能力。6.与细胞周期相关的基因中,PANC-1干扰F3后能够上调CCNB1、CDKN2C、CDC20、CCNF、ID2、PPM1D、CCND3、GTSE1、CCNA2、ATRIP、CDKN1A、SHC1、JAG2 以及 MDM2,下调 GADD45A、JUN、PKD1、CCND2、BMP2、EGFR、CDKN1C、G0S2、SESN2、TERT 以及 PPP1R15A。7.与细胞运动能力相关的基因中,PANC-1干扰F3后能够上调TJP2、DIAPH1、TGFB1、CAPN1、PERP 以及 MST1R,下调 CTNND2、MYLK、VEGFA、ICAM1、ADAMTS13、DOCK4、PVRL3、MAP1B、EGFR 以及 RND3。8.与细胞外基质降解相关的基因中,PANC-1干扰F3后能够上调MMP3,下调CTGF、CLEC3B、COL8A1、COL12A1、MMP11、COL16A1、COL1A1 以及 ADAMTS13。9.与细胞粘附相关的基因中,PANC-1干扰F3后能够上调CD44,下调CTGF、SELE、SPP1、CLEC3B、COL8A1、COL12A1、ADAMTS13、ICAM1 以及 COL16A1。10.与上皮-间充质转化相关的基因中,PANC-1干扰F3后能够上调MST1R、TGFB1、SHC1、ZAK、DSC2、SYK、MMP3、TGFB3 以及 NOTCH4,下调 COL1A1、FYN、EGFR、MAP1B、KRT19、NOTCH3、COL8A1、BPM2、COL12A1、SNAI12、ZEB2、SPP1、WNT5A 以及 TLN2。11.MCM抑制PP2Ac上调F3表达后,在其下游有46个基因mRNA的表达量上调,有44个基因mRNA的表达量下调。其中,CCNB1、CCNA2、GTSE1、GADD45A与生长相关,MAP1B、TJP2、CD44与转移相关。结论:炎症通过抑制PP2Ac上调F3的表达导致GADD45A、MAP1B上调,TJP2下调促进了胰腺癌的发生发展,这为研究胰腺癌发生发展的分子机制提供了一条新的思路。