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目的:研究烟草悬凝物(cigarette smoke condensate ,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞(immortalized human bronchial epithelial cells, BEP-2D cells)细胞恶性转化过程中p16基因甲基化的变化,以探讨吸烟致肺癌发生机制,为防治吸烟致肺癌提供理论依据。方法:将BEP-2D细胞分为对照组细胞(BEP-2D cells)及实验组细胞(BEP-2DCSC cells);通过MTT实验及细胞克隆形成实验确定慢性诱导物CSC最佳诱导剂量,并以此剂量诱导BEP-2D细胞慢性恶性转化,用巢式PCR( nested-methylation-specific PCR, nested- PCR)方法检测其恶性转化过程中p16基因甲基化的情况。结果: 1. MTT实验结果示CSC浓度在2.0μl/ml及以下时,24h、48h及72h细胞存活率均大于50%;细胞克隆形成实验结果示CSC浓度在2.0μl/ml及以下时细胞克隆形成率降低不明显。2. CSC诱导BEP-2D细胞恶性转化模型的建立:①实验组P25细胞血清抗性显著增强;②实验组P38细胞具有锚着独立生长特性;③实验组P38细胞在裸鼠体内成瘤,病理组织学为中分化鳞形细胞癌。3.对照组细胞p16基因甲基化无表达,而在实验组P15、P25、P38、P43细胞都有表达,同时P15、P25、P38、P43细胞p16基因mRNA转录水平均降低。结论:1. CSC对BEP-2D细胞最佳诱导剂量为2.0μl/ml。2.用CSC(2μl/ml)能成功诱导BEP-2D细胞恶性转化,可作为模拟吸烟环境下人支气管上皮细胞慢性恶性转化的理想模型。3. p16基因甲基化在恶性转化的早期即发生,并一直维持表达,同时p16基因甲基化可导致p16基因mRNA转录水平降低。