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研究背景结肠癌是结肠粘膜上皮在环境、遗传等多种致癌因素作用下发生的恶性病变。近年来,我国结肠癌的发病率有逐渐增高的趋势。结肠癌通常起病隐匿,早期往往无明显的临床表现,病情发展缓慢,当出现明显的症状时大多已到了中晚期。深入研究癌症发生和发展的分子机制,进而开发癌症的新型治疗药物,是现今基础生物医学研究的重要前沿。17-DMAG为HSP90抑制剂,有望成为进展期结肠癌的新型治疗药物。研究目的研究HSP90抑制剂17-DMAG(17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素)对人结肠癌HT-29细胞的凋亡的影响,进一步使用蛋白质组学方法研究其调控的蛋白质的变化。研究方法一、AnnexinV--FITC/PI双染法流式细胞仪检测经17-DMAG作用后HT-29细胞的凋亡率的变化。二、免疫印迹实验验证Na+-K+-ATPase和Prohibitin在17-DMAG作用HT-29细胞24小时后质膜蛋白质纯度变化。三、使用0.5μM/L17-DMAG作用24小时组与对照组的质膜蛋白质,运用双向凝胶电泳技术分离蛋白质,快速银染法染色胶、扫描,进一步用ImageMaster2D Platinum6.0图像分析软件分析每组中的差异蛋白质点。四、使用0.5μM/L17-DMAG作用24小时组与对照组的分泌蛋白质,运用双向凝胶电泳技术分离蛋白质,快速银染法染色胶、扫描,进一步用ImageMaster2D Platinum6.0图像分析软件分析每组中的差异蛋白质点。研究结果1AnnexinV-FITC双染法流式细胞仪检测结果显示,正常对照组HT-29细胞24小时自然早期凋亡率为(0.87±0.02)%,0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L17-DMAG作用24小时后细胞早期凋亡率分别为(2.32±1.78)%、(4.93±0.46)%、(6.86±1.36)%与(7.59±1.28)%；正常对照组HT-29细胞24小时的总自然凋亡率(早期+晚期)为(6.3±0.75)%,0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L17-DMAG作用24小时后细胞总凋亡率分别为(8.51±1.91)%、(20.88±13.97)%、(25.11±1)%和(32.11±3.13)%,17-DMAG作用HT-29细胞24h的凋亡率与对照组细胞凋亡率相比差异有统计学意义。(P=0.000),此外,0.5μmol/17-DMAG作用HT-29细胞12h、24h和36h的早期凋亡率和总凋亡率与相应的对照组比较均有升高,差异有统计学意义(P<0.05)。20.5μmol/17-DMAG药物作用HT-29细胞24h后,Na+-K+-ATPase纯度增加而Prohibitin纯度下降。0.5μM17-DMAG药物作用HT-29细胞24小时组与对照组比较发现29个蛋白质差异点。30.5μM17-DMAG药物作用HT-29细胞24小时组与对照组比较发现8个蛋白质差异点。研究结论热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-DMAG呈现时间-剂量依赖性抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,随着药物浓度的加大,作用时间的延长,诱导HT-29结肠癌细胞凋亡的能力增加。应用蛋白质组学分析发现0.5μM17-DMAG药物作用24小时组与对照组比较发现29个质膜蛋白质差异点和8个分泌蛋白质差异点。