肠源性脓毒症腹腔渗液致急性肺损伤的机理研究

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目的:通过观察肠源性脓毒症腹腔渗液门、腔静脉注射所致肺损伤情况,探索肠源性脓毒症腹腔渗液导致急性肺损伤的机理。方法:采用清洁级健康成年SD大鼠108只,随机提取12只作为模型组(腹腔渗液组),采用盲肠结扎并穿孔法(CLP),制备肠源性脓毒症腹腔渗液(EFIS)模型,采集腹腔渗液,以精密过滤输液器(过滤介质孔径5μm)过滤去除直径大于5μm的颗粒状物,滤出液备用;其余96只大鼠随机分为渗液组(E组,n=48)和对照组(S组,n=48);每组再随机分为门静脉亚组(PV组、n=24)、腔静脉亚组(VC组、n=24),各亚组按1h,2h,4h,6h时间点再分为4个次亚组,每个次亚组6只大鼠,共16个次亚组。E组分别经门、腔静脉注射处理后的腹腔渗液(1ml/只),S组注射等量的无菌生理盐水;各组大鼠分别于注射后第1h,2h,4h,6h时间点经腹主动脉采血、处死后取材肺标本、收集肺泡灌洗液(BALF);观察肺的形态学改变;测定肺湿/干比值(W/D);肺组织经固定、切片、染色处理后,光镜下阅片、病理学评分;酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定腹腔渗液、血清及BALF中TNF-α及IL-6含量。MB-80微生物快速动态检测系统测定腹腔渗液、血清及BALF中LPS含量;所有数据采用SPSS17.0 for Windows统计软件进行处理,P<0.05为差异有统计学意义,P<0.01为具有显著差异。结果:1)每只大鼠可采集5-10ml腹腔渗液,其性状为淡黄色或淡粉色略混浊样液体。细菌涂片镜检见革兰氏阴性杆菌,细菌培养分离出8株细菌,其中大肠杆菌菌落数最多;腹腔渗液中亦检测出一定水平的LPS、TNF-α及IL-6。2)两组对照组(PV-S、VC-S组)各观察时间点的肺形态学及光镜所见、病理学评分、肺湿/干重比值(W/D)、血清及BALF中LPS、TNF-α及IL-6水平均无明显差异,均无统计学意义(P>0.05)。渗液组(PV-E、VC-E组)与对照组(PV-S、VC-S组)相比较:各观察时间点肺形态学及光镜所见差异显著,肺组织病理学评分、肺湿/干重比值(W/D)、血清及BALF中LPS、TNF-α及IL-6测定值均较对照组(PV-S、VC-S组)明显增高,差异具有显著统计学意义(aP<0.01,bP<0.01)。3)肺脏大体形态学及光镜所见:门静脉组(PV-E)各时间点肺脏大体观:肺的水肿、出血程度均较腔静脉组(VC-E)明显;镜下所见:肺泡壁、肺间质水肿程度,肺泡腔中性粒细胞及单核细胞浸润程度,肺泡间质、肺泡腔充血出血程度均较腔静脉组(VC-E)明显;4)病理学评分:PV-E组各时间点肺组织病理学评分均较VC-E组高,PV-E组1h即出现明显肺损伤,出现时间较VC-E组早,且随时间呈递进式加重,PV-E组与VC-E组病理学评分相比较,差异具有统计学意义(aP<0.05)。5)肺湿/干重比值(W/D)测定:PV-E组与VC-E组各观察时间点的肺湿/干重比值(W/D)相比较,差异均具有统计学意义(a P<0.05);6)血清及BALF中LPS水平:PV-E组与VC-E组各时间点LPS水平均呈逐渐下降趋势,但PV-E组下降更明显;与VC-E组相比较,1h、2h、4h时间点LPS水平差异明显,均具有统计学意义(b P<0.05),两组间6h时间点LPS水平无明显差异(P>0.05)。7)血清及BALF中TNF-α及IL-6水平:PV-E组与VC-E组血清及BALF中TNF-α及IL-6水平的测定水平在各观察时间点均逐渐增高,TNF-α水平4h达峰值,达峰值后6h有下降趋势;IL-6水平6h达最高值。PV-E组与VC-E组相比较,各时间点TNF-α及IL-6水平差异均具有统计学意义(aP<0.05)。结论:⑴.利用CLP方法可成功制备肠源性脓毒症模型,腹腔渗液经门静脉及腔静脉注射均可造成大鼠急性肺损伤;⑵.肠源性脓毒症腹腔渗液中存在大肠杆菌为主的多种致病菌、LPS、TNF-α及IL-6等主要成分;⑶.门静脉组血清及肺泡灌洗液中LPS水平低于腔静脉组,TNF-α及IL-6水平明显高于腔静脉组,而肺损伤程度比腔静脉组明显严重,LPS水平及TNF-α、IL-6水平与肺损伤严重程度具有一定的相关性,提示LPS是炎症介质的启动因素,而TNF-α及IL-6是肠源性脓毒症导致急性肺损伤的主要因素;腹腔渗液经肝脏作用与否,肺损伤的程度不同,提示肝脏在肠源性脓毒症肺损伤的发生发展中可能起某种关键作用。
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