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目的:探讨丹参酮ⅡA纳米粒在体内的药物分布,对人肝癌细胞的生长在抑制作用和对小鼠肝癌的治疗作用,并从细胞凋亡和细胞内信号转导角度揭示其治疗肝癌的机制。
方法:体外抗肿瘤实验:MTT法观察丹参酮ⅡA纳米粒对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用。
丹参酮ⅡA纳米粒对小鼠肝癌的治疗作用:建立小鼠移植性肝癌模型并随机分为如下几组分别经尾静脉给药:生理盐水组(NS,25ml/kg)、空白纳米组(125 mg/kg)、丹参酮ⅡA组(1mg/kg)、丹参酮ⅡA纳米低剂量组(0.5mg/kg)、丹参酮ⅡA纳米中剂量(1 mg/kg)、丹参酮ⅡA纳米高剂量(2 mg/kg)。比较治疗后各组小鼠的肿瘤生长情况、肿瘤坏死程度和生存时间。
丹参酮ⅡA纳米粒体内药物分布研究:选家兔耳缘静脉注射丹参酮ⅡA纳米并和丹参酮ⅡA比较,观察药物在各脏器的分布特征。
丹参酮ⅡA纳米粒对肝癌细胞凋亡和增殖相关蛋白表达的影响:采用TUNEL标记法检测治疗后的肝癌细胞凋亡,采用IHC S-P法检测治疗后的小鼠肝癌组织细胞凋亡增殖和凋亡相关的蛋白表达变化。
丹参酮ⅡA纳米粒诱导肝癌细胞凋亡的信号转导研究:人肝癌细胞常规培养,采用FCM检测细胞凋亡、并观察阻断p38MAPK信号转导通路对人肝癌细胞周期和细胞凋亡、Fas、caspase-3 mRNA表达的影响。
结果:
体外抗肿瘤实验:MTT法测得从丹参酮ⅡA纳米粒中释放的丹参酮ⅡA对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制率均有显著的抑制作用,其作用与剂量和作用时间成正相关,最高生长抑制率达94.37%,72小时IC50为6.81μg/ml。
丹参酮ⅡA纳米粒对小鼠肝癌的治疗作用:治疗后与等剂量丹参酮ⅡA相比,丹参酮ⅡA纳米粒对小鼠肝癌肿瘤生长抑制更明显,生存期更长,且丹参酮ⅡA纳米粒随剂量增加抗癌效果增强。丹参酮IIA纳米粒体内药物分布研究:丹参酮IIA以纳米的剂型给药后2小时,丹参酮IIA纳米粒组肝脏和肿瘤中的浓度均高于丹参酮IIA组,肝脏中的药物浓度提高了5倍以上,肿瘤中的药物浓度提高了近9倍;心、肾、脾、肺等组织中药物浓度均明显降低;血液中浓度下降了近10倍。提示丹参酮IIA纳米粒具有良好的肝肿瘤靶向特征。
丹参酮IIA纳米粒对肝癌细胞凋亡和增殖相关蛋白表达的影响:与等剂量的丹参酮IIA相比,丹参酮IIA纳米治疗小鼠肝癌出现细胞凋亡增加、p38MAPK的表达上升、CyclinE蛋白表达下降。
丹参酮IIA纳米粒诱导肝癌细胞凋亡的信号转导研究:丹参酮IIA纳米作用肝癌细胞后,出现明显的肝癌细胞凋亡,细胞阻止于G0/G1期,Fas、caspase-3 mRNA的表达明显上调。阻断p38MAPK信号转导通路后Fas、caspase-3 mRNA的表达均明显降低,并出现凋亡率下降,G0/G1期细胞比例降低。
结论:
1.与丹参酮IIA相比,丹参酮IIA纳米粒静脉给药后在肝脏和肿瘤中的药物浓度显著提高,血浆、心、肾、脾、肺等组织中药物分布明显减少,具有良好的肝肿瘤靶向特征。
2.丹参酮IIA以纳米剂型给药抗癌效果明显增强。并具有量效依赖性。丹参酮IIA纳米对小鼠肝肿瘤具有较好的治疗作用,并能明显延长荷瘤小鼠的生存期。
3.丹参酮IIA纳米粒治疗肝癌的机制与诱导肝癌细胞凋亡、阻滞肝癌细胞于G0/G1期有关。
4.通过p38MAPK信号转导上调Fas、easpase-3 mRNA是丹参酮IIA纳米粒诱导肝癌细胞凋亡的重要机制之一