缺氧缺血性新生大鼠脑皮质内质网应激相关因子的表达及参附注射液的干预作用

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目的:研究缺氧缺血性新生大鼠脑皮质神经元内质网应激相关因子氧调节蛋白150(oxygen regulate protein150,ORP150)、X-盒结合蛋白1(X-box binding protein1,XBP-1)和CHOP(C/EBP homologous protein,CHOP)的表达变化,以探讨它们在缺氧缺血性脑损伤中的作用,并初步探讨参附注射液(SFI)干预治疗后对其影响及可能机制。   方法:将新生7H龄Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为三组:假手术组(S)、生理盐水对照组(C)、参附治疗组(SF)。每一组按照观测的时间点不同分为3h、6h、12h、24h、3d、7d六个亚组,每个亚组8只。用Rice法制备新生大鼠H1BD模型。在每个时间点将大鼠断头取右侧皮质脑组织,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠皮层脑组织中ORP150、XBP-1及CHOP的mRNA表达变化;采用Western-Blot法测定ORP150及CHOP的蛋白表达变化;用TUNEL染色法检测相应时间点光镜下脑皮质组织的凋亡细胞。   结果:   1.RT-PCR条带显示假手术组ORP150、XBP-1及CHOP的mRNA表达很弱;生理盐水对照组与参附治疗组ORP150、XBP-1及CHOP的mRNA在缺氧缺血(HI)后3h即表达增加,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);ORP150mRNA在HI后6h仍有较高表达,12h及24h即明显下降,7d时接近假手术组。参附治疗组ORP150mRNA在HI后各时间点的表达水平均接近生理盐水对照组(P>0.05);XBP-1mRNA及CHOPmRNA的表达量分别在HI后6h、12h时达到峰值,之后均有所回落,7d时接近假手术组水平;其中参附治疗组XBP-1mRNA及CHOPmRNA表达量12h、24h、3d时均较生理盐水对照组明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。   2.Westem-bolt蛋白印迹显示假手术组ORP150及CHOP的蛋白均有少量表达;生理盐水对照组与参附治疗组ORP150及CHOP蛋白在HI后3h即表达增加,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);HI后12-24h ORP150蛋白表达明显下降,7d时接近假手术组。参附治疗组ORP150在HI后各时间点的蛋白表达水平均接近生理盐水对照组(P>0.05);HI后CHOP蛋白表达在24h达到高峰,3d后下降,7d时接近假手术组。参附治疗组CHOP蛋白表达量12h、24h、3d时较生理盐水对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。   3.HI后3h生理盐水对照组与参附治疗组即发现结扎侧脑皮质有少量的凋亡细胞,随着缺氧缺血时间的延长,凋亡细胞逐渐增多,24h达到高峰后下降;SF组在HI后24h、3d、7d均明显低于C组(P<0.05)。   结论:   1.新生大鼠脑缺氧缺血后诱发了内质网应激反应,ORP150、XBP-1及CHOP参与了新生大鼠HIBD后迟发性神经元的损伤过程。   2.大鼠缺氧缺血后,CHOP其动态变化与神经细胞凋亡相平行,可能在神经细胞凋亡中发挥作用。   3.参附注射液可能通过下调XBP-1、CHOP的表达,抑制内质网应激反应及随后的凋亡信号通路,减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤。  
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