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目的:通过构建LIMK1沉默的MGC803细胞系,观察LIMK1沉默与罗格列酮(Rosiglitazone,ROS)对胃癌裸鼠腹腔移植瘤的影响。方法:利用慢病毒介导的RNAi(RNA interference)构建LIMK1靶向沉默的表达载体感染胃癌MGC803细胞,建立LIMK1沉默表达的MGC803细胞系,设立干扰组、空载体(empty-vector,EV)组及空白对照组,运用Western-Blot技术检测转染后的各组胃癌细胞中LIMK1蛋白的表达情况。收集三组MGC803细胞,裸鼠腹腔内直接注射细胞悬液构建胃癌裸鼠腹腔移植瘤模型,观察裸鼠成瘤情况,待腹腔移植瘤成瘤后,每组随机分为两组,实验组、对照组分别予以ROS、生理盐水灌胃处理。接种42天后解剖裸鼠,观察各组裸鼠腹腔内成瘤及肿瘤转移情况,予以计算各组裸鼠肿瘤个数、测量瘤体最大长径及瘤体总重量并计算抑瘤率,观察ROS与LIMK1沉默对裸鼠腹腔移植瘤生长与转移的影响;HE染色观察裸鼠瘤体组织形态学改变,免疫组化学和Western-Blot方法检测ROS处理前后各组腹腔转移瘤组织内LIMK1蛋白的表达情况。结果:1、成功构建LIMK1沉默的胃癌MGC803细胞系委托上海吉凯基因化学技术有限公司构建LIMK1干扰慢病毒重组载体。将干扰载体和空载体分别感染胃癌MGC803细胞,72h后荧光显微镜下可见大量绿色荧光,表明Lv-LIMK1-shRNA-MGC803细胞系构建成功。Western-Blot对LIMK1表达水平进行检测,结果显示干扰组较空载体组及空白对照组LIMK1蛋白条带窄、颜色浅,表达水平明显下降,差异有统计学意义(p<0.05),而空载体组和空白对照组之间LIMK1蛋白表达差异无统计学意义(p>0.05)。2、成功构建胃癌裸鼠腹腔移植瘤模型接种后第42天,处死裸鼠,肉眼观察到部分裸鼠腹腔内可见血性腹水,肠管及肠系膜、大网膜、腹壁、腹腔淋巴结以及肝脏表面可见多处大小不等、分布不均的粟粒结节状的瘤体,计算各组裸鼠腹腔内脏器成瘤情况,可见LIMK1干扰组(A、D组)与空载体组(B、E组)和空白对照组(D、F组)对比,腹腔脏器成瘤率显著降低,差异有统计学意义(p<0.05);空载体组与空白对照组对比,差异无显著性(p>0.05)。3、LIMK1沉默对ROS抑制胃癌MGC803细胞裸鼠腹腔移植瘤的影响(1)解剖标本,测量各组裸鼠腹腔各脏器转移瘤的个数、最大直径、瘤体总重量结果显示,LIMK1干扰组瘤体个数、最大直径及总瘤重明显低于EV组和空白对照组,差异有统计学意义(p<0.05),而ROS处理后,各组瘤体个数、最大直径及总瘤重低于处理前(p<0.05)。LIMK1干扰组(D组)、EV组(E组)较空白对照组(F组)瘤重抑瘤率分别为35.54%、3.85%,经ROS处理后,LIMK1干扰组、EV组及空白对照组较处理前瘤重抑瘤率分别为46.48%、19.57%、20.90%。(2)HE染色结果显示,ROS灌胃处理后,灌药组(A、B、C组)与未灌药组(D、E、F组)对比,细胞异型性下降,核分裂象减少,细胞核染色变浅,核浆比例减小,以LIMK1干扰组细胞异型性最小。(3)免疫组织化学法检测结果显示:各组瘤体组织中均可见LIMK1表达,但干扰组较EV组与空白对照组表达弱,经ROS灌胃处理后,灌药组较未灌药组LIMK1表达较处理前低。(4)Western-Blot检测各组腹腔移植瘤组织LIMK1蛋白的表达情况,干扰组与EV组和空白对照组对比,LIMK1蛋白表达低,差异有统计学意义(p<0.05),而EV组与空白对照组比较,差异无统计学意义(p>0.05),ROS灌胃后,LIMK1的表达较处理前明显下调,ROS灌胃组与未灌药组比较差异有显著性(p<0.05)。结论:1、LIMK1沉默可抑制胃癌MGC803细胞裸鼠腹腔移植瘤的生长与转移。2、罗格列酮可抑制胃癌MGC803细胞裸鼠腹腔移植瘤的生长与转移。3、LIMK1可能是罗格列酮抑制胃癌MGC803细胞裸鼠腹腔移植瘤生长与转移的作用靶点。