目的：通过无血清悬浮培养建立富集食管癌OE-19细胞株中干细胞的方法，并鉴定其生物学特性和有无放射抵抗性。方法：通过贴壁和悬浮的方法培养食管癌OE-19细胞株并用流式细胞仪检测其干细胞表型CD44的表达，观察两群细胞的生长特点、软琼脂克隆形成能力极其在射线照射后CD44表达的变化。结果：无血清培养添加生长因子的方法成功的培养出了富集干细胞表型为CD44的悬浮细胞球。用流式细胞仪对悬浮细胞球和贴壁生长细胞进行干细胞表型CD44鉴定，悬浮细胞球表达率为62.46%，而普通贴壁生长细胞为11.74%。软琼脂克隆形成试验显示悬浮细胞球比贴壁生长细胞具有更强的增殖能力及软琼脂形成能力。悬浮细胞球和贴壁生长细胞经射线照射5Gy、10Gy、15Gy后，前者CD44阳性细胞出现弱阳性和强阳性两群，CD44强阳性细胞的比例逐渐降低，分别为77.8%、66.5%、57.53%，弱阳性细胞比例逐渐增加，分别为21.65%、31.57%、41.38%，而后者CD44阳性细胞比例则随照射剂量的增加而降低，分别为18.93%、14.05%、9.95%,但悬浮细胞球和贴壁生长细胞在照射剂量增加至30Gy时，存活细胞比例显著减少，且在存活的细胞中均检测不到CD44阳性细胞。结论：通过无血清培养的悬浮细胞球具有自我更新分化能力，较强的增殖能力、软琼脂形成能力、较高的CD44表达率及放射抵抗性，为富集的食管肿瘤干细胞的细胞球，CD44可能为食管癌干细胞的标志物。