唾液和阴道分泌物在性犯罪案件中经常出现,其鉴别具有重要的司法意义,但由于二者在组织发生上均来源于上皮细胞而具有较高的相似性,因此准确区分鉴定至今仍是法医学领域研究的业务难点。研究显示人体口腔和阴道的微环境差异显著且有相对稳定的菌群结构,因此基于其中的特异性微生物进行唾液和阴道分泌物的区分具有良好的理论基础和应用潜力。本研究基于微生物法医学检验的应用需求,采集制作了140份成年健康个体的唾液、阴道分泌物、精液斑迹及皮肤擦拭物样本,使用16S r RNA基因测序技术对这四种体液或组织样本进行检测,以期了解唾液斑迹、阴道分泌物斑迹、精液斑迹、皮肤擦拭物样本的微生物群落结构特征并筛选唾液斑迹和阴道分泌物斑迹中具有显著差异的微生物为标记,利用实时荧光定量PCR技术验证标记的特异性和有效性,并构建基于毛细管电泳技术的8重微生物标记荧光复合扩增检测体系,实现对唾液斑迹、阴道分泌物斑迹的区分鉴定。主要结果如下:（1）四种不同体液斑迹或组织样本微生物群落结构差异显著。皮肤的微生物多样性最高,精液斑迹、唾液斑迹样本次之,阴道分泌物斑迹样本的微生物群落多样性最低。四种体液组织类型样本的组间差异显著大于组内差异,同种体液组织类型的样本聚集在一起。唾液斑迹样本的优势菌是链球菌属（Streptococcus）、奈瑟氏菌属（Neisseria）、嗜血杆菌属（Haemophilus）;阴道分泌物斑迹样本的优势菌主要是乳杆菌属（Lactobacillus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）、普雷沃氏菌属（Prevotella）;精液斑迹样本的优势菌为乳杆菌属、青枯菌属（Ralstonia）;皮肤擦拭物样本的优势菌为丙酸杆菌属（Propionibacterium）、棒杆菌属（Corynebacterium）、栖水菌属（Enhydrobacter）。另外,性别因素对唾液微生物群落的组成和相对丰度没有显著影响;但女性皮肤的微生物群落多样性高于男性,男性皮肤样本拥有更高相对丰度的棒杆菌属和栖水菌属,并且Gp I属、鞘脂菌属（Sphingobium）在两组间存在统计学差异。（2）唾液和阴道分泌物可以利用差异微生物进行区分。副流感嗜血杆菌（Haemophilus parainfluenzae）、浅黄色奈瑟氏菌（Neisseria subflava）、殊异韦荣菌（Veillonella dispar）、Porphyromonas catoniae、口腔链球菌（Streptococcus oralis）、具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum）可作为唾液微生物标记;惰性乳杆菌（Lactobacillus iners）、短双歧杆菌（Bifidobacterium breve）可作为阴道分泌物微生物标记。（3）8重微生物标记荧光复合扩增检测体系用于唾液和阴道分泌物的鉴别效果良好。5个唾液微生物标记（浅黄色奈瑟氏菌、唾液链球菌、非典型韦荣氏菌、Porphyromonas catoniae、口腔链球菌）和3个阴道分泌物标记（加氏乳杆菌、短双歧杆菌、卷曲乳杆菌）均可在相应目标体液中检出,唾液和阴道分泌物的微生物标记没有交叉反应,唾液和阴道分泌物鉴定的正确率为100%。本复合体系针对阴道分泌物样本的检测灵敏度可达0.125 ng,唾液样本为0.0625 ng。另外,本复合体系检测过程中提取的DNA还可以获取供体的STR位点信息,能满足法医DNA检验中通过STR分型进行个体识别的需求。本研究揭示了人体各类体液组织样本的微生物群落结构特征,构建的8重微生物标记荧光复合扩增体系进行唾液和阴道分泌物的区分鉴定具有良好的应用前景。