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目的:检测长链非编码RNA GHET1(long non-coding RNA gastriccarcinoma high expressed transcript 1,lncRNA GHET1)在肝癌组织和细胞中的表达变化情况,探索其在肝癌发生发展过程中的作用,并探讨其可否作为肝癌和肝癌肝移植患者预后的标志物和临床治疗靶标。方法:(1)收集20例肝癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测肝癌组织和对应的癌旁组织中GHET1的表达,(2)检测人肝癌细胞株Huh7,HepG2细胞和人肝脏永生细胞株LO2中GHET1的表达,筛选出体外GHET1基因高表达的肝癌细胞模型。(3)设计针对GHET1的特异性序列siRNA(small interference double-stranded RNA,siRNA),实验分为lncRNA GHET1干扰RNA(GHET1-siRNA),对照干扰RNA(siRNA-NC)和空白对照组(Con)。使用倒置荧光显微镜来观察转染效率。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测并验证siRNA干扰后GHET1的表达变化情况。(4)用构建的GHET1-siRNA和siRNA-NC转染筛选出来的肝癌细胞株。用CCK-8法检测沉默GHET1表达对肝癌细胞增殖的影响;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;最后Western blot检测EMT相关的基因表达的改变。(5)采用qRT-PCR检测182例肝癌切除患者的HCC组织和106例肝癌肝移植组织中GHET1的表达,结合临床病理资料分析GHET1不同表达与肝癌肝移植临床病理特征和预后的关系。结果:(1)与临近非肿瘤组织相比,qRT-PCR检测GHET1在肝癌组织中表达增高(P<0.001),且HCC细胞系中GHET1表达水平也明显上调(P<0.001);(2)采用GHET1-siRNA转染Huh7,HepG2细胞与对照组siRNA-NC相比,GHET1表达下调(p<0.001);(3)CCK-8结果显示,Huh7,HepG2细胞中GHET1的表达下调可抑制细胞增殖(P<0.001)。(4)Transwell小室侵袭、迁移实验显示,沉默GHET1后HCC侵袭和迁移的细胞穿过膜的数目显著降低,差异有显著性(P<0.001)。(5)Western blot检测Huh7细胞中敲减GHET1显著增加E-钙粘蛋白表达,同时降低纤连蛋白和波形蛋白水平(P<0.01)。(6)在肝癌患者的研究中,临床病理学特征分析结果提示GHET1的高表达与肝癌患者的肿瘤大小,血管侵犯,Edmonson分级,肿瘤包膜和血清AFP水平显著相关(均p<0.05)。GHET1表达与其他临床病理特征均无显著相关性(均P>0.05)。(7)采用Kaplan-Meier方法和秩和检验进行统计分析,结果提示GHET1过表达HCC患者总生存期显著短于低表达患者(P<0.01)。为了确定总复发(OR)和总生存(OS)临床病理因素的预后意义,多因素分析显示,GHET1高表达均是HCC中OR(HR=0.584,95%CI:0.352-0.968,P=0.037)和OS(HR=1.730,95%CI:1.071-2.797,P=0.025)预后不良的独立预测因子;(8)ROC曲线用于评估GHET1表达对HCC的诊断预测能力,结果显示在4.255的截断值与OR有关(AUC=0.748,95%CI0.677,0.819,p<0.001);而在4.740的截断值与OS相关(AUC=0.746,95%CI 0.673,0.818,p<0.001)。(9)在肝癌肝移植患者的研究中,临床病理学特征分析结果表明GHET1表达与肝癌肝移植患者的肿瘤包膜(P<0.001),肿瘤直径(P=0.005),分化程度(P=0.006),血管侵犯(P=0.009)和TNM分期(P=0.001)等密切相关,而与患者的年龄,性别,肝硬化,血清AFP水平,血清NLR值,实体瘤位置和实体瘤数量等无关(p>0.05)。同时GHET1表达与移植术后有无肝癌复发具有相关性(p<0.001)。(10)采用Kaplan-Meier方法和秩和检验进行统计分析,结果提示GHET1过表达肝癌肝移植患者累积生存率显著低于低表达患者(P<0.01),GHET1过表达肝癌肝移植患者累积复发率显著高于GHET1低表达患者(P<0.01)。结论:(1)GHET1基因在肝癌组织中及不同肝癌细胞系中的表达上调具有共性。(2)siRNA沉默干扰GHET1表达使人肝癌细胞Huh7,HepG2增殖也受到抑制,同时出现侵袭和迁移能力减弱;(3)在Huh7细胞中敲减GHET1影响EMT相关的基因表达。(4)GHET1在肝癌中起着癌基因的作用,可以作为预测和诊断HCC患者的预后不良的指标。(5)GHET1过表达与肝癌肝移植患者临床病理资料和不良预后相关,对肝癌肝移植的OR与OS预测有意义。本研究结论提示GHET1可能参与肝癌的发生和发展过程,可作为肝癌和肝癌肝移植患者评价预后的标志物和临床治疗靶标。