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目的: 本实验旨在探明补肾活血中药复方新加归肾丸对雷公藤多苷所致卵泡发育障碍模型大鼠的治疗作用,通过对模型大鼠卵巢颗粒细胞上卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)及雌激素受体(ER)蛋白表达变化的观察,试图从分子生物学角度初步阐明补肾活血中药复方新加归肾丸治疗卵泡发育障碍的药理作用机制。 方法: (1)大鼠含药血清的制备及灭活:选择7-8周龄雌性SD大鼠25只,体重200~220g,随机分为雷公藤多苷组、西药对照组(戊酸雌二醇组)、空白对照组、中药高剂量组、中药低剂量组,每组5只。每只大鼠组每次以1ml/100g灌胃,即每只大每天鼠灌胃2ml,连续4天,前3天每日灌胃2次,禁食12h后,最后一天一次灌胃全天量,1h后无菌条件下股动脉采血并制备血清备用。 (2)大鼠卵巢颗粒细胞的分离和培养:选择7-8周龄雌性大鼠,体重200~220g,适应性喂养3天,皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG)40IU。48h后颈椎脱臼法处死,分离卵巢颗粒细胞及培养48h,将颗粒细胞分为空白对照组、雷公藤多苷组(GTW组)、西药对照组、中药高剂量组和中药低剂量组,每组设5孔,空白对照组加入空白对照组大鼠血清200μl,其余各组加入雷公藤多苷含药血清各200μl,培养48h。取出各组细胞,空白对照组继续加空白对照组大鼠血清,雷公藤多苷组继续加入雷公藤多苷含药血清,其余3组各加入对应药物含药血清各200μl,继续培养,48h后收集各组颗粒细胞,进行ER、FSHR、LHR蛋白表达的检测。 结果: 与空白对照组相比,雷公藤多苷组大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR、ER蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。应用不同剂量补肾活血复方中药新加归肾丸含药血清作用48h后,与雷公藤多苷组相比较,中药高剂量组大鼠卵巢颗粒细胞中FSHR、ER、LHR蛋白表达均增强,差异具有统计学意义(P<0.05);与雷公藤多苷组相比较,中药低剂量组大鼠卵巢颗粒细胞中LHR蛋白表达增强,差异具有统计学意义(P<0.05),FSHR、ER蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。与中药低剂量组相比,中药高剂量组大鼠卵巢颗粒细胞中FSHR、ER蛋白表达较好,差异具有统计学意义(P<0.05),LHR蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。中药高剂量组与西药对照组相比大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、ER、LHR蛋白表达无明显差异,不具有统计学意义(P>0.05)。 结论: 1.以雷公藤多苷80mg/(kg.d)灌胃大鼠获取的含药血清能有效抑制体外培养的大鼠颗粒细胞增殖。 2.补肾活血中药复方新加归肾丸对卵泡发育障碍模型大鼠颗粒细胞上FSHR、ER、LHR蛋白表达有增强作用,提示补肾活血中药复方新加归肾丸治疗卵泡发育障碍模型大鼠可能与改善卵巢颗粒细胞上FSHR、ER、LHR蛋白表达有关。 3.与中药低剂量组相比,中药高剂量组改善大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、ER蛋白表达的作用更好。中药低剂量组与中药高剂量组改善大鼠卵巢颗粒细胞LHR蛋白表达的作用相似。 4.中药高剂量组与西药对照组相比改善大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、ER、LHR蛋白表达的作用相似。 5.实验结果又可反证肾虚血瘀可能是女性卵泡发育障碍的主要病因之一。补肾活血法是治疗卵泡发育障碍的主要方法之一,其分子生物学作用机制可能是通过增强颗粒细胞上FSHR、ER、LHR蛋白表达而促进颗粒细胞的生长,进而改善生殖内分泌,最终逆转卵泡发育障碍的病理状态。