林麝（Moschus berezoviskii）是国家一级保护野生动物,雄麝分泌的麝香可作为中药材和香料使用,具有稀有和名贵的特点。为解决麝香供需矛盾实现林麝资源保护,我国开展了林麝人工饲养繁殖产业,但林麝养殖受制于多种疾病的影响。与规模化养殖的畜禽相比,圈养林麝的发病率和死亡率居高不下,疾病的防治成为人工养麝产业发展的关键因素之一。干扰素ω（Interferon-omega,IFN-ω）是一种受到病毒等异源物质刺激后产生的分泌性糖蛋白,具有调节免疫功能、广谱抗病毒和抗细胞增殖的作用。同时,作为一种与先天免疫反应有关的细胞因子,IFN-ω的水平受到宿主、病原体或特定环境因素的调控。当机体受到病毒或其他病原微生物入侵时,IFN-ω的表达水平会发生变化。因此,IFN-ω在林麝疾病防治方面有着广泛的应用前景。为了探究林麝干扰素ω（Fmd IFNω）的临床应用价值,本研究对同源克隆得到的Fmd IFNω进行了原核表达和蛋白质的细胞活性检测。此外,为了监测林麝机体的免疫状态,达到表征其健康状况的目的,本实验还建立了一种检测林麝内源性IFN-ω水平的间接ELISA方法。主要试验结果如下:1.林麝干扰素ω基因克隆及其序列分析:使用同源克隆的方法首次得到5种长度为588 bp的Fmd IFNω基因亚型,分别为Fmd IFNW1—Fmd IFNW5,编码195个氨基酸。经生物信息学分析,结果显示,5种亚型氨基酸序列的总体一致性为97.23%,有18个氨基酸存在差异。该蛋白含有1个信号肽片段、2个IFNAR结合位点和1个N-糖基化位点,为不稳定的蛋白。Fmd IFNω在进化树上与牛IFN-ω关系最近。蛋白质的空间结构与牛和人的IFN-ω相似,均由5个明显的α螺旋组成。2.林麝干扰素ω的原核表达与活性分析:使用大肠杆菌BL21表达系统,以p GEX-6P-1为载体构建Fmd IFNω重组质粒,经诱导表达得到了约为48 k Da的可溶性目的蛋白r Fmd IFNω。表达产物经纯化后得到单一的目的蛋白条带。使用纯化后的r Fmd IFNω蛋白进行林麝肺成纤维细胞FMD-C1刺激试验,经实时荧光定量（q PCR）分析下游的干扰素刺激基因（ISG）,结果显示,各ISGs的转录水平与对照组相比出现了最高217倍的提升,转录积累量呈时间依赖性,表明该蛋白有细胞活性。3.林麝干扰素ω间接ELISA方法的建立:以r Fmd IFNω蛋白为抗原免疫小鼠,获得抗体效价为1:1600的小鼠血清。通过对ELISA反应中各组分及反应条件优化,最终建立了检测Fmd IFNω的间接ELISA方法。该方法阳性临界值为0.495,阴性临界值为0.468,变异系数均不大于7%,具有较好的重复性。用建立的间接ELISA方法检测四川养麝研究所8头林麝的血清,阳性率为100%。综上所述,本研究成功克隆了Fmd IFNω的5个亚型,完成了相关生物信息学分析,通过原核表达获得了有活性的r Fmd IFNω蛋白,并成功建立了一种检测林麝内源性干扰素ω的间接ELISA方法,为林麝临床疾病的防治提供了新的方案。