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目的:苯并（a）芘（benzo（a）pyrene,B（a）P）是一种广泛存在于人们生产、生活环境中的化学环境致癌物。已被报道证实孕早期B（a）P暴露会影响胚胎植入过程,降低胚胎着床数,影响子宫内膜蜕膜化,表现出明显的生殖毒性。7,8-二羟-9,10-环氧化苯并[a]芘（benzo[a]pyrene-7,8-diol-9,10-epoxide,BPDE）是B（a）P的代谢物和最终致癌产物,不仅可以干扰正常妊娠导致胎儿生长受限、流产,还会引起子代染色体异常,诱发胎儿出生缺陷。卵巢黄体通过分泌孕酮和雌激素调节胚胎植入过程,而卵巢颗粒细胞作为一种重要的类固醇分泌细胞,在卵母细胞停止排卵后,卵泡内残余的颗粒细胞在LH的刺激下转变为黄体化颗粒细胞,继续分泌孕酮以维持雌性哺乳动物的妊娠。本研究建立hCG诱导黄体化的小鼠卵巢颗粒细胞（KK-1）模型,探讨B（a）P代谢产物BPDE对颗粒细胞黄体化功能的影响及其机制。方法:（1）建立细胞染毒模型:使用不同浓度的hCG（0、0.1、0.5、1.0IU/mL）诱导颗粒细胞黄体化,筛选出能够成功诱导黄体化的hCG浓度（1.0 IU/mL）,然后联合不同浓度的BPDE（0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L）处理KK-1细胞,利用qRT-PCR检测类固醇激素合成相关分子3β-HSD,17β-HSD和P450SCC的mRNA水平,western blot检测类固醇生成蛋白StAR的表达,验证BPDE是否影响颗粒细胞的黄体化。（2）使用CM-H2DCFDA法测定颗粒细胞中的氧化应激水平,通过测量线粒体中JC-1的荧光强度来检测线粒体膜电位变化。（3）使用TUNEL法观察颗粒细胞凋亡水平;免疫荧光检测凋亡相关基因BAX、BCL2的表达及Cyt C的释放。（4）Western blot检测颗粒细胞褪黑素受体MT1和MT2的表达。（5）补充褪黑素受体激动剂后,再一次检测颗粒细胞氧化应激和凋亡水平。（6）免疫荧光、western blot、qRT-PCR检测GAS1在颗粒细胞的表达。（7）建立染毒孕鼠模型:选择0.2mg/kg/d的B（a）P染毒有效剂量从小鼠妊娠第一天（D1）开始灌胃,收取孕第4天（D4）和第7天（D7）的卵巢组织,对照组用玉米油灌胃。免疫荧光、western blot、qRT-PCR检测GAS1在孕D4和孕D7天小鼠卵巢的表达。结果:（1）BPDE暴露下调了颗粒细胞中类固醇激素合成相关分子水平,证实BPDE损害小鼠卵巢颗粒细胞的黄体化。（2）BPDE暴露增加了KK-1细胞氧化应激水平。（3）BPDE暴露诱导了KK-1细胞凋亡。（4）BPDE暴露使KK-1细胞中褪黑素受体表达降低。（5）补充褪黑素受体激动剂后缓解了BPDE诱导的颗粒细胞凋亡。（6）B（a）P和BPDE分别在体内和体外影响了GAS1的表达。结论:本研究表明BPDE暴露损害小鼠卵巢颗粒细胞黄体化,影响了类固醇激素合成相关分子表达,在这个过程中增加了颗粒细胞氧化应激水平,促进了细胞凋亡。此外,BPDE暴露还影响褪黑素受体的表达,补充褪黑素受体激动剂后一定程度上缓解了BPDE诱导的氧化应激和凋亡。GAS1可能参与了BPDE诱导的卵巢功能失调,但其机制需要进一步探究。