目的:　　 伴随着多种新型诊疗技术的发展，医院感染也在不断增加，产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌已成为院内感染主要的病原菌之一。ESBLs能够水解三代头孢菌素及单环β-内酰胺类抗生素，表现出对多种抗菌药物耐药，容易引起院内感染的暴发流行。尽早查明感染源及其流行特点和趋势可以有效地控制感染的流行。目前公认的鉴定传染源的主要方法是对细菌进行基因分型和同源性分析。但是，迄今有关细菌的分型还没有一个统一的标准，脉冲场电泳分型方法(PFGE)是美国疾病控制中心(CDC)推荐的基因分型方法。本文应用PFGE方法，对中国医科大学附属盛京医院第二新生儿内病房64株肺炎克雷伯菌进行了基因分型和同源性分析。对其流行特点进行了探讨。　　 方法及结果:　　 1.ESBLs检测　　 按照NCCLS/CLSI推荐的确诊试验方法进行操作，用头孢他啶(CAZ，30μg/片)和头孢他啶加克拉维酸(CAZ/CLV，30μg/10μg);头孢噻肟(CTX，30μg/片)和头孢噻肟加克拉维酸(CTX/CLV，30μg/10μg);分别测量两种纸片单独及加克拉维酸的抑菌环直径，加克拉维酸与不加克拉维酸的抑菌环直径比较≥5mm可确认为ESBLs菌株。质控菌株:肺炎克雷伯氏菌ATCC700603(CAZ/CLV:CAZ≥5mm)。64株菌中有58株阳性。　　 2.药敏分析　　 使用纸片扩散法，用常见的26种抗生素纸片对从第二新生儿内病房中分离的58株产ESBLs院内感染肺炎克雷伯菌进行药敏检测，操作及结果判断参照NCCLS/CLSI2010年标准。结果发现，这些菌株对阿米卡星，四环素，环丙沙星，头孢西丁较敏感;对亚胺培南，美罗培南敏感率达100％;对氨曲南，氨苄西林，哌拉西林，头孢克洛，头孢吡肟，头孢哌酮，头孢噻肟，头孢喹啉，头孢他啶，头孢呋辛基本耐药，对其他抗生素有不同程度的耐药。　　 3.PFGE分型　　 58株产ESBLs菌株经Xba I酶切后共产生30条大小不同的片段（图3），根据带型的不同可以分为A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N共14个类型。其中A型为流行菌株，共21株，包含5个亚型，A1型有17株，A2，A3，A4，A5各一株。B型两个亚型，B1包含7株，B2包含1株。C型为1株。D型有D1和D2两个亚型，D1有6株，D2有1株。剩余各型分别为E型4株，F型2株，G型2株，H型3株，I型2株，J型6株，K、L、M、N型各1株。　　 4.流行病学分析　　 2010年下半年-2011年12上半年第二新生儿内病房出现了A1亚型的肺炎克雷伯菌的流行。2011年8月、9月爆发了B1亚型的肺炎克雷伯菌的流行。2011年11月、12月爆发了D1亚型的肺炎克雷伯菌的流行。　　 结论:　　 1.在第二新生儿病房中产ESBLs的肺炎克雷伯菌比列较大，耐药性严重，应引起重视。　　 2.中国医科大学附属盛京医院第二新生儿病房存在着同源性的肺炎克雷伯菌株的流行。　　 3.PFGE是一种稳定、精确的基因分型方法，适合用作院内感染的同源性分析。