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目的氧化应激可诱发细胞衰老,衰老是心血管疾病新的危险因素。已有研究证实白藜芦醇在心血管的保护作用,但具体作用机制还不清楚。白藜芦醇是SIRT1促进剂,PGC-1α是一种重要的辅激活因子,两者在内皮细胞的氧化应激中的作用机理及与衰老相关蛋白p53/p21的关系,有待进一步研究。因此,本研究通过氧化应激诱导细胞衰老,加入不同浓度白藜芦醇干预,分析探讨白藜芦醇SIRT1/PGC-1α诱导的自噬作用与细胞氧化应激及衰老的关系。方法1.实验KM小鼠分正常组(NC)、D-半乳糖组(D-gal)、低、中、高剂量白藜芦醇+D-半乳糖组(L-RESV)、(M-RESV)、(H-RESV),分离血清和心肌测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平、乳酸脱氢酶(LDH)和心肌酶(CKMB)以及测定衰老蛋白P53、p21表达量及自噬蛋白LC3、p62表达量。2.脐静脉内皮细胞加入5、10、50μmol/L白藜芦醇干预,检测细胞ROS、NO、ET-1、MDA、SOD的变化及LC3、p62、p53、p21等蛋白的表达变化。3.脐静脉内皮细胞加入10 μmol/L白藜芦醇及自噬抑制剂3-MA及SIRT1抑制剂EX-527作用1小时后,再加入100μmol/L过氧化氢作用24h,分别检测细胞活力及氧化指标及内皮功能的变化,蛋白电泳检测衰老相关指标p53、p21,自噬相关指标SIRT1、PGC-1α、LC3及p62等蛋白的表达变化。结果:1.与D-gal组比,RESV组能减少小鼠心肌组织MDA及血清LDH、CKMB含量,增加心肌SOD含量(P<0.05),RESV通过促进自噬,下调衰老相关蛋白p53、p21蛋白(P<0.05),其中M-RESV组作用明显。2.过氧化氢可诱导细胞衰老相关蛋白p53和p21以及细胞自噬负相关蛋白p62的上调。而在衰老细胞中,不同浓度白藜芦醇可下调p53、p21蛋白的表达(p<0.05),同时也可上调LC3 Ⅱ/Ⅰ的比值,促进p62蛋白的降解(p<0.05),其中10μmol/L白藜芦醇作用明显。3.10μmol/L白藜芦醇干预后,氧化应激的内皮细胞LC3蛋白增加,p62蛋白减少,SOD增加,ROS、MDA及ET-1含量减少,内皮功能NO生成增加,提示白含量芦醇能增强衰老细胞的自噬能力,减少氧化应激。而当加入3-MA时,白藜芦醇这种作用受到抑制。4.10 μmol/L白藜芦醇可提高SIRT1、PGC-1α蛋白的表达(p<0.05),下调p53及p21蛋白量。在加入SIRT1抑制剂EX527后,SIRT1、PGC-1α、LC3蛋白表达及p62蛋白分解明显被抑制(p<0.05),p53及p21蛋白表达水平上升(p<0.05)。结论:1.氧化应激可增加小鼠心肌和脐静脉内皮细胞p53、p21蛋白表达,白藜芦醇能通过增加自噬作用,下调皮p53、p21蛋白减少氧化应激,延缓组织细胞衰老。2.氧化应激状态下,低浓度的白藜芦醇促进心肌及内皮细胞自噬,延缓衰老;高浓度的白藜芦醇起抑制作用。3.白藜芦醇可以通过上调SIRT1/PGC-1α的水平促进细胞自噬,下调p53/p21通路改善过氧化氢诱导的脐静脉内皮细胞衰老。