镁离子螯合酶D亚基互作蛋白P43功能研究

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叶绿素是植物进行光合作用的主要色素分子,也是植物中最丰富的四吡咯化合物。镁离子螯合酶是叶绿素合成分支途径的第一个酶,也是关键酶,它能催化镁离子螯合到原卟啉Ⅸ中形成镁原卟啉Ⅸ。镁离子螯合酶是由I、D和H(CHLI、CHLD和CHLH)三个亚基组成的异源聚合酶。   镁离子螯合酶各亚基除参与催化镁离子的螯合外,还参与其它的生物学功能,且能够与其它蛋白发生相互作用,如H亚基是SigE的反式作用因子,并且能够与镁原卟啉Ⅸ甲基转移酶发生相互作用等。   本研究主要围绕镁离子螯合酶D亚基的互作候选蛋白——DNA复制辅助蛋白P43展开,主要包括两方面:   一方面,利用酵母双杂交技术、GST-Pulldown技术、双分子荧光互补技术、免疫共沉淀等分别从体内、体外验证了P43与镁离子螯合酶CHLD的互作关系,说明叶绿素合成途径与DNA复制之间可能存在生物学联系。   另一方面,利用VIGS技术、酵母双杂交系统分析、Westernblot分析等对P43的生物学功能进行了探讨。实验结果显示在烟草和拟南芥中可能存在着P43的同源蛋白。通过小量筛选酵母双杂交文库,得到了两个P43的互作候选蛋白,利用VIGS技术得到了镁离子螯合酶CHLI、CHLD的抑制植株,对其进行Westernblot分析,结果显示抑制植株中P43的含量并无明显变化,说明了镁离子螯合酶CHLD虽然能与P43发生相互作用,但CHLD的缺失并不会造成P43蛋白含量的明显改变。RNA结合试验显示P43可能结合RNA,并具有RNase活性。
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