帽儿山地区异色瓢虫种群的单链构象多态性(SSCP)分析

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异色瓢虫(Harmonia axyridis Pallas)是一种多型性昆虫,其鞘翅上的色斑变化丰富,许多分类学者常以此对其归纳分类。本论文运用PCR-SSCP方法对13种不同色斑型异色瓢虫的COⅠ基因进行分析,以此来研究该基因在不同色斑型之间的关系。针对扩增出的COⅠ基因,优化了SSCP技术的实验条件,摸索出一套稳定而合适的SSCP方法,并结合DNA测序对实验结果进行检验和分析,得到的研究结果如下:首先,利用改良的CTAB法,成功得提取了单只异色瓢虫的基因组DNA,扩增出的目的条带能很好的满足PCR-SSCP实验的要求。与传统的剪碎虫体,匀浆提取的方法相比:该方法程序简单,所用时间短,而且费用低廉。其次,在运用PCR-SSCP方法对COⅠ基因的分析中,优化了PAGE的电泳条件,适合于本实验的电泳条件是:凝胶浓度:5%、交联度:29:1、电压:150V(15h)、甘油:无、电泳缓冲液:1×TBE、样品和变性剂比例:3:3。在该条件下,DNA单链能明显地区分开,但各色斑型之间单链的构象变化不明显。通过DNA测序进一步分析,所扩增的目的基因片段在685bp左右。各色斑型之间,有约600bp的区域高度保守,在其中有碱基变化的有:二斑变型、拟月斑变型、16斑变型和眼斑变型。各斑型之间的遗传相似度比较高:94%-100%,其中16斑变型和眼斑变型、19斑变型和暗黄变型之间的遗传相似度为100%。说明在这13种色斑型中,他们之间的亲缘关系最近。
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