【摘 要】
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牛呼吸道疾病综合征（Bovine respiratory disease complex,BRDC）是引起世界各国牛呼吸道疾病和死亡的主要原因。感染BRDC的牛会出现发烧、呼吸急促、反复咳嗽、流鼻涕或眼泪、腹泻、脱水和食欲不振等症状,对牛的健康和日常生产造成巨大的损害,严重阻碍了养牛业的持续发展。牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus,
【基金项目】
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新疆生产建设兵团重点领域科技攻关计划项目“兵团牛羊集约化养殖场幼畜高发疫病病原库建立”（项目编号:2019AB029）； 兵团国际科技合作计划项目“集约化牛羊养殖合理用药与安全评价关键技术研究”（项目编号:2019BC004）； 兵团区域创新引导计划“犊牛高发细菌性疫病疫苗候选菌株筛选及其灭活疫苗研究”（项目编号:2018BB03
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牛呼吸道疾病综合征（Bovine respiratory disease complex,BRDC）是引起世界各国牛呼吸道疾病和死亡的主要原因。感染BRDC的牛会出现发烧、呼吸急促、反复咳嗽、流鼻涕或眼泪、腹泻、脱水和食欲不振等症状,对牛的健康和日常生产造成巨大的损害,严重阻碍了养牛业的持续发展。牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）,牛副流感3型病毒（Bvine parainfluenza virus type3,BPIV3）,牛呼吸道合胞体病毒（Bovine respiratory syncytial virus,BRSV）是引起BRDC的三种主要病毒性病原。目前新疆地区对IBRV、BPIV3、BRSV的相关研究报道较少,尤其在犊牛方面,流行分布及其特征数据匮乏,因此对新疆集约化牛场犊牛IBRV、BPIV3、BRSV开展相关研究,并为防控该病提供科学依据。本研究利用套式PCR、RT-PCR方法对来自新疆石河子、塔城、乌鲁木齐、克拉玛依、巴州、阿克苏和伊犁7个地区的14个集约化牛场采集的407份犊牛鼻拭子样品进行IBRV g B基因、BPIV3M基因和BRSV F基因PCR检测,并对BRSV F基因阳性样品进行G基因分型。使用BPIV3 M基因和BRSV G基因进行同源性与遗传进化分析。结果表明,IBRV、BPIV3、BRSV在新疆牛场平均阳性率分别为10.57%（43/407）、6.14%（25/407）、4.18%（17/407）,其中IBRV在乌鲁木齐A场阳性率最高为80.00%（20/25）;BPIV3在石河子I场阳性率最高为22.73%（5/22）;BRSV在石河子J场阳性率最高为51.90%（14/27）。经同源性比对,SHZ001～007共7条序列与B基因型澳大利亚Q5592参考株（EU277658.1）的同源性为88.8%～91.1%;TC001、TC002、SHZ008～023共18条序列与C基因型宁夏NX49参考株（KT071671.1）的同源性为92.6%～97.5%;YL001、YL002、SHZ001～015共17条序列与来自美国的BRSV III亚群参考株USII/S1（KU159366.1）的同源性为91.6%～94.4%。遗传进化分析发现,BPIV3阳性样本中具有B、C两种基因型,BRSV阳性样本均为III亚群。利用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法对来自新疆石河子、塔城、乌鲁木齐、克拉玛依、巴州、阿克苏6个地区的13个集约化养殖场的380份犊牛血清样品进行抗体检测。结果显示,犊牛IBRV、BRSV抗体平均阳性率分别为70.26%（267/380）、80.79%（307/380）,抗体双阳性平均阳性率为62.11%（236/380）。IBRV 6个地区抗体阳性率为35.59%～100.00%,其中巴州和克拉玛依两地阳性率最高为100.00%,阿克苏最低为35.59%;BRSV 6个地区抗体阳性率为70.00%～100.00%,其中克拉玛依阳性率最高为100.00%,石河子最低为70.00%。利用MDBK细胞对20份BPIV3阳性样本进行病毒分离,接毒培养72 h后9份样本出现明显细胞病变,经RT-PCR扩增与测序比对确定为BPIV3。对XJ21032-1、XJ20055-3分离株进行IFA试验发现其均可与BPIV3多克隆抗血清反应产生特异性绿色荧光,通过形态学观察发现其均与副粘病毒相似,而后利用高通量测序技术对其进行基因组测序。经同源性比对发现XJ21032-1分离株与澳大利亚参考株Q5592同源性最高为93.4%,XJ20055-3分离株与宁夏参考株NX49同源性最高为99.6%。遗传进化树分析发现,XJ21032-1分离株为BPIV3 B基因型,XJ20055-3分离株为BPIV3 C基因型。在新疆集约化牛场犊牛群中IBRV、BPIV3、BRSV感染较为普遍,且存在混合感染现象,其中BRSV主要为III亚群,而BPIV3存在B、C两种基因型,其中以C型为主,这也是BPIV3 B基因型分离株在我国的首次报道,证明了BPIV3 B基因型在中国的存在。本研究为IBRV、BPIV3、BRSV的防控以及之后的疫苗研发提供了数据支持。
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