自体骨髓间充质干细胞移植于脊髓损伤处的存活及分化

来源 :遵义医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:j19871010
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目的:观察自体移植的骨髓间充质干细胞(BMSCs)在脊髓半横断损伤处的存活及分化情况。方法:36只雄性SD大鼠被随机分为BMSCs自体移植组(即实验组)和PBS对照组,每组18只。BMSCs自体移植组的大鼠均截取左侧胫腓骨进行骨髓的采集,联合采用密度梯度离心与贴壁筛选法纯化培养BMSCs至第4代并对其表型进行鉴定,建立脊髓半横断损伤模型后立即在脊髓半横断损伤处及其上下3mm范围内各选取1个注射点,每个注射点注射经Hoechst33342标记的单细胞悬液3ul(细胞密度为5×103个/ul);PBS对照组亦在上述位置各注射3ul PBS液。于移植后2周、3周及5周行损伤部位脊髓冰冻切片观察细胞局部存活情况,同时行免疫荧光组织化学染色检测自体移植的BMSCs是否表达微管相关蛋白-2(MAP-2)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结果:1.流式鉴定第4代BMSCs,其CD29及CD90的表达率分别为97.17%、99.49%,基本上不表达造血干细胞的表面标志CD45。2.BMSCs移植后的2周、3周及5周,注射点周围均可见经Hoechst33342标记的细胞存活,其中2周时细胞存活较多,5周时细胞存活较少。3.BMSCs移植后的2周及3周未检测到存活细胞表达MAP-2及GFAP,而5周时检测到部分存活细胞表达MAP-2及GFAP。结论:1.采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养BMSCs,其第4代细胞纯度高,可用于后续细胞移植实验。2.脊髓损伤后立即进行自体移植的BMSCs可在脊髓损伤处存活,部分存活细胞向神经元和星形胶质细胞方向分化。
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