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目的：乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝DNA病毒，主要引起急、慢性肝炎、肝硬化和肝癌等。HBV的逆转录酶缺乏校正阅读功能，故HBV的变异率较其他DNA病毒高十倍以上，其基因变异对慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者病情发展、严重程度以及对抗病毒治疗疗效都有一定的影响。拉米夫定(lamivudine)是第一种用于治疗乙肝的核苷类药物，但长期用药后易导致HBV的变异，从而出现病毒耐药。HBV变异位点主要存在于HBV聚合酶C结构域的YMDD(酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸)基因序列，最常见的突变位点是M204氨基酸置换，产生YMDD变异(rtM204IV/I)，即YMDD变为YVDD或YIDD。为探讨YMDD变异株是在药物作用下所致，还是变异株本来就与野生株共存，逐渐取代野生株成为优势毒株，本研究采用基因芯片技术对57例未经抗病毒治疗的慢性乙肝病毒感染者进行YMDD及其变异株的检测，分析未经拉米夫定治疗的HBV病毒YMDD变异出现的情况，探讨HBV病毒YMDD变异出现可能的机理，了解以YMDD自然变异的慢性HBV感染患者血清病毒载量和肝损害情况，以及与病毒基因型的关系。
方法：
1. 收集住院或门诊HBV DNA阳性，未经拉米夫定治疗的慢性HBV感染者血清标本57例，且均已做了基因型检测，其中B基因型50例，C基因型6例，B+C混合型1例；然后按临床表现和其他检查资料分为无症状携带者23例(其中B基因型19例，C基因型3例，B+C混合型1例)，轻、中度慢性乙肝26例(均为B基因型)，重型肝炎、肝硬化6例(其中B基因型4例，C基因型2例)，肝癌2例(其中B基因型1例，C基因型1例)。
2．用基因芯片技术对上述57份血清进行YMDD及其变异株的检测，分析未经拉米夫定治疗的HBV病毒YMDD变异出现的情况，了解以YMDD自然变异的慢性HBV感染患者血清病毒载量和肝损害情况，以及与病毒基因型的关系。首先将血清标本经PCR扩增出YMDD序列，引物用生物素(Biotin)进行标记，并分别取各扩增产物进行凝胶电泳，电泳后条带显示均为阳性。将扩增产物变性，与基因芯片上特异性探针杂交、显色后，判定HBV野生株(YMDD)、突变株(YVDD、YIDD)及其共生状态和相对优势株。
3．对YMDD自然变异患者的上述临床资料使用SPSS10.0软件进行统计学处理，了解变异与临床表现的关系，采用t检验及X2检验，以P>0.05为无统计学差异，P<0.05为差异有显著性。
结果：57例未经拉米夫定治疗的慢性HBV感染者中，有29例检测出YMDD变异，阳性率50.89％，且均为野生株与突变株的混合感染，其中23例(40.35％)为YMDD与YVDD混合株，6例(10.53％)为YMDD与YVDD、YIDD混合株。其中39例男性患者中有22例被检测出有YMDD变异，18例女性患者中有7例发生了YMDD自然变异，两者变异阳性率差异无统计学意义(X2=1.513，p=0.219>0.05)。YMDD野生株和变异株的HBV-DNA水平分别为106.464±1.427拷贝/毫升和107.069±1.280拷贝/毫升(t=1.686，p=0.098，p>0.05)，HBeAg阳性率分别为19/28(67.86％)和23/29(79.31％)(X2=0.964，p=0.326>0.05)，差异均无统计学意义。YMDD野生株和变异株的ALT水平分别为221.04±467.38u/L和226.09±322.54u/L(t=0.048，p=0.962，p>0.05)，AST水平分别为224.69±495.48 u/L和150.25±181.55u/L(t=0.758，p=0.451>0.05)，ALB(白蛋白)水平分别为40.80±5.02g/L和42.38±6.38g/L(t=1.037，p=0.304>0.05)，TBIL水平分别为29.70±63.31 umol/L和37.78±68.57umol/L(t=0.462，p=0.646>0.05)，二者间的肝功能损害无显著性差异。YMDD自然变异发生率在无症状携带者、轻中度慢性乙肝、重型肝炎及肝硬化和肝癌等不同临床类型慢性肝病中无显著性差异(X2=3.309，p=0.346>0.05)。本实验所收集病例的基因型比较单一，大部分均为B基因型(87.72％)，且所检测的突变株均为YVDD阳性，故可能提示B基因型更容易发生YVDD变异。
结论：本实验采用基因芯片法对57例未经拉米夫定治疗的慢性HBV感染者进行YMDD及其变异株的检测，该方法操作简单，具有多位点的平行检测特点，可同时检测野生株和变异株的类型。YMDD变异株与野生株一样自然存在。HBVYMDD自然变异发生率与性别、病毒复制水平、肝功能损害程度及临床类型均无关，提示YMDD变异并不增加肝功能损害的严重程度。B基因型可能更容易发生YVDD变异，故在拉米夫定耐药突变后，B基因型以WDD突变为主。