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目的:通过研究miR-107在CVB3感染Hela细胞过程中的表达差异,探索其对CVB3复制的调控作用及机制,旨为CVB3感染相关疾病的临床诊断提供新的理论依据和新型生物标志物。方法:1.筛选出CVB3感染相关的miRNA;采用RT-qPCR方法确定miR-107的差异表达情况。2.在Hela细胞中过表达或沉默miR-107后感染CVB3,通过RT-qPCR方法检测转染效率,并收集感染至6h的总蛋白;Western blot检测病毒衣壳蛋白VP1的表达,分析miR-107对CVB3复制增殖的影响;收集上清液进行病毒蚀斑实验,分析miR-107对CVB3释放的影响。3.通过TargetScan和miRTarBase数据库筛选出miR-107的靶基因KLF4和BACE1,采用荧光素酶报告载体实验进行靶点验证。4.Hela细胞过表达或沉默靶基因后感染CVB3并收集感染6h的总RNA和总蛋白,RT-qPCR和Western blot分析靶基因的表达变化,以及靶基因对CVB3复制增殖的影响;同时收集上清液进行病毒蚀斑实验,分析靶基因对病毒CVB3释放的影响。5.Hela细胞内转染miR-107的上游lncRNA004787质粒,RT-qPCR检测过表达效率,收集感染6h的总蛋白,Western blot检测衣壳蛋白VP1,分析对CVB3复制增殖的影响;病毒蚀斑实验分析lncRNA004787对病毒CVB3释放的影响。结果:1.CVB3感染Hela细胞后,miR-107水平逐渐升高,6h达最高。CVB3的衣壳蛋白VP1在4h可被Western blot实验方法检出。2.CVB3感染过表达miR-107的Hela细胞6h后,与对照组相比,VP1表达升高,病毒蚀斑数目增多,镜下细胞病变增多;CVB3感染敲减miR-107的Hela细胞6h后,VP1蛋白表达量,病毒蚀斑数目均下降。3.数据库预测发现:miR-107靶向基因KLF4和BACE1的3’UTR,双荧光素酶实验发现,与对照组相比,野生组荧光素表达低,突变组荧光素表达无明显变化,表明miR-107对BACE1存在靶向作用。4.CVB3感染过表达KLF4或BACE1的Hela细胞6h后,VP1蛋白表达降低,病毒蚀斑数目减少;CVB3感染敲减KLF4或BACE1的Hela细胞6h后,VP1蛋白表达升高,病毒蚀斑产生的数量增多。5.CVB3感染过表达lncRNA004787的Hela细胞6h后,实验组VP1蛋白表达和病毒蚀斑数较对照组低;CVB3感染敲减lncRNA004787的Hela细胞6h后,与对照组相比,实验组VP1蛋白表达和病毒蚀斑数均下降。结论:MiR-107通过负向调控靶基因KLF4和BACE1的表达,在一定程度上促进CVB3的复制增殖。