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受体相互作用蛋白家族（Receptor-interacting protein,RIP）是一类具有苏氨酸/丝氨酸激酶活性的蛋白,可以接受细胞表面受体传递的胞外刺激,参与模式识别受体的信号转导,在调节先天免疫、炎症反应和维持机体稳态方面起着重要的作用。已报道的RIP家族一共包含7个成员,RIP1、RIP2和RIP3是最先鉴定出的成员。本研究对大黄鱼RIP1、RIP2和RIP3基因进行了克隆与鉴定,探究了大黄鱼RIP1、RIP2和RIP3基因在不同器官/组织中和不同病原相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）刺激下的表达情况、细胞中的定位、介导的细胞信号转导通路以及在大黄鱼免疫反应中的作用,主要结果如下:大黄鱼RIP1的开放阅读框（Open reading frame,ORF）全长2046 bp,编码681 aa,其基因结构与其他脊椎动物RIP1的结构一致,包含10个外显子和9个内含子。通过荧光定量PCR检测RIP1基因在健康大黄鱼各组织/器官中以及不同PAMPs刺激下的表达情况,结果显示RIP1在健康大黄鱼的检测组织/器官中均有表达,在鳃中的表达量最高,在肾中表达最低,且大黄鱼鳃、肠、脾、头肾、肾与血液组织中RIP1的表达水平在聚肌苷酸胞苷酸（Polyinosinic:polycytidylic acid,poly I:C）、脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）、肽聚糖（Peptidoglycan,PGN）和变形假单胞菌（Pseudomonasplecoglossicida）刺激下显著上调。利用荧光示踪质粒揭示了 RIP1分子的亚细胞定位,结果表明大黄鱼RIP1为胞浆蛋白。通过双荧光素酶报告基因检测技术研究了 RIP1对核转录因子κB（NuclearfactorκB,NF-κB）、干扰素调节因子3（Interferonregulatoryfactor3,IRF3）、干扰素调节因子7（Interferon regulatory factor 7,IRF7）及干扰素（Interferon,IFN1）启动子的激活作用,结果表明大黄鱼RIP1过表达可显著诱导NF-κB启动子的激活,大黄鱼线粒体抗病毒信号蛋白（Mitochondrial antiviral-signaling protein,MAVS）、肿瘤坏死因子受体相关因子3（TNF receptorassociated factor 3,TRAF3）、肿瘤坏死因子受体相关因子 6（TNF receptor associated factor 6,TRAF6）、IRF7与RIP1在NF-κB启动子的激活过程中具有协同作用,而RIP1是β干扰素TIR结构域接头蛋白（TIR domain-containing adaptor-inducing IFNβ,TRIF）介导的 NF-κB活化的负调节因子,同时RIP1在IRF3介导的信号转导通路中起着负调控作用。克隆获得大黄鱼RIP2的ORF,全长1695bp,编码564aa,其氨基酸序列与两栖类、鸟类和哺乳动物的序列同源性为40%-47%,与其他硬骨鱼类的序列同源性为63%-74%,大黄鱼RIP2基因由11个外显子和10个内含子组成。亚细胞定位结果表明大黄鱼RIP2分布在细胞质中,在细胞核周围有明显的聚集分布。表达分析结果显示大黄鱼RIP2在鳃中表达水平最高,在血液中表达水平最低,poly I:C、LPS、PGN刺激和P.plecoglossicida感染能显著诱导大黄鱼RIP2的mRNA表达水平升高。荧光素酶结果显示大黄鱼RIP2具有很强的诱导NF-κB活化的效果,与MAVS、TRAF3、TRAF6和IRF7在NF-κB启动子的激活过程中具有协同作用,但会显著抑制TRIF所介导的NF-κB的活化。另外,大黄鱼RIP2是IRF3和IRF7所介导的IRF3启动子活化的正调控因子,与TRIF、MAVS、TRAF3和TRAF6在IRF7启动子的激活过程中具有协同作用,同时,RIP2在IRF3介导的IFN信号转导通路中也起着正调控作用。此外,大黄鱼RIP2过表达能够显著抑制SVCV病毒在细胞中的复制。大黄鱼RIP3的ORF由1524个核苷酸组成,编码507 aa,鱼类和哺乳动物RIP3的基因结构并不一致,大黄鱼RIP3由11个内含子和12个外显子组成,且不同物种RIP3基因的外显子大小差异较大。亚细胞定位结果表明大黄鱼RIP3为胞质分布,在细胞核周围有些许的聚集。表达分析结果显示大黄鱼RIP3在鳃中表达水平最高,在血液中最低,不同PAMPs刺激能显著上调大黄鱼黏膜免疫组织、外周免疫组织、血液和肾中RIP3的表达水平。荧光素酶结果显示大黄鱼RIP3有显著诱导NF-κB活化的作用,与RIPI、TRAF6和IRF7在NF-κB启动子的激活过程中具有协同作用,而与TRIF、TRAF3和IRF3共转却会显著降低NF-κB的活化效果。RIP3会促进IRF3所介导的IRF3启动子活化,但却会抑制IRF3所介导的IFN1启动子的激活。综上所述,本研究首次从大黄鱼中克隆了RIP1、RIP2和RIP3基因,揭示了大黄鱼RIP1、RIP2和RIP3的表达特征,分析了它们在免疫相关信号转导通路和大黄鱼抗感染免疫中发挥的作用,初步阐明了大黄鱼RIP1、RIP2和RIP3基因的免疫功能,为深入解析硬骨鱼类的免疫应答和抗病机制奠定了基础。