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目的:脊髓小胶质细胞促炎M1型活化状态及促炎因子的释放可能与吗啡耐受发展机制相关。μ/δ阿片受体异聚体参与调控痛觉缺失,我们前期预实验提示其与吗啡耐受过程存在关联。本研究提取大鼠小胶质细胞,初步探讨在吗啡刺激下,μ/δ阿片受体异聚体在调节体外小胶质细胞激活状态、P2X4R（P2X4 receptor,P2X4R）及促炎因子IL-1β中的作用,探究μ/δ阿片受体异聚体干扰多肽(MORTM1-TAT)在吗啡耐受大鼠痛觉过敏及脊髓M1型活化标志物CD86、P2X4R的表达中的作用,为防治吗啡耐受提供有潜力的理论依据,探索可能存在的细胞分子机理。方法:实验分为细胞实验和动物实验。细胞实验:1.探究在吗啡刺激下,μ/δ阿片受体异聚体对小胶质细胞激活类型、P2X4R表达情况的影响;2.探究在吗啡刺激下,μ/δ阿片受体异聚体和P2X4R对小胶质炎症因子IL-1β合成释放的影响。细胞实验主要有三部分,将提取好的大鼠小胶质细胞种于6孔板,采用随机数字表法分组。第一部分分为4组（n=6）,对照组（Control组）、吗啡组（Morphine组）、μ/δ阿片受体异聚体激动剂组（MA组）、吗啡+μ/δ阿片受体异聚体干扰剂组（MI组）,采用细胞免疫荧光检测小胶质细胞活化类型标记物、μ阿片受体、δ阿片受体;免疫印迹检测P2X4R的表达量;免疫共沉淀检测μ/δ阿片受体异聚体的含量。第二部分分为6组（n=6）:对照组（Control组）、吗啡组（Morphine组）、MORTM1TAT组（I组）、5-BDBD组（T组）、吗啡+MORTM1TAT组（MI组）、吗啡+5-BDBD组（MT组）,RT-PCR检测IL-1βmRNA,Elisa法检测IL-1β蛋白。第三部分分为4组（n=6）:对照组（Control组）、吗啡组（Morphine组）、5-BDBD组（T组）、吗啡+5-BDBD组（MT组）,孵育结束后,加入终浓度为3μM的ATP孵育4h,Elisa法检测培养基中IL-1β蛋白。动物实验:1.探究MORTM1-TAT对大鼠疼痛学行为的影响;2.探究MORTM1-TAT对大鼠脊髓CD86和P2X4R表达的影响。取鞘內置管成功的大鼠24只随机分为3组:对照组（Control组）、吗啡组（M组）、吗啡+MORTM1-TAT(M+MORTM1-TAT)组。Control组鞘內注射生理盐水;M组鞘內注射吗啡溶液;M+MORTM1-TAT组前七天处理同M组,第八天额外鞘內注射MORTM1-TAT溶液。第八天检测MORTM1-TAT对大鼠疼痛学行为的影响:测缩足反应阈值（PWT）的时间:分别在给干扰药MORTM1-TAT前、给干扰药MORTM1-TAT后15min、30min、60min、90min和120min时。在给药后120min时,用免疫蛋白印迹对各组大鼠脊髓中CD86与P2X4R的进行定量。结果:细胞实验中,第一部分:免疫荧光及免疫共沉淀结果显示,与Control组相比,MA组和Morphine组CD86（P<0.05）、μ/δ阿片受体异聚体表达明显增加（P<0.05）、CD206表达差异无统计学意义（P>0.05）;与Morphine相比,MI组CD86、μ/δ阿片受体异聚体表达量下降、CD206表达明显增加（P<0.05）。免疫印迹结果显示,与Control组相比,MA组和Morphine组P2X4嘌呤受体（ionotropic purinoceptor,P2X4R）表达增加（P<0.05）;与Morphine相比,MI组P2X4R表达量下降（P<0.05）。第二部分:免疫印迹结果显示,与Control组相比,Morphine和MT组IL-1βmRNA和蛋白表达量显著增加（P<0.05）;与Morphine相比,MI组IL-1βm RNA和蛋白表达量显著下降（P<0.05）。第三部分:ELISA结果显示,与Control组相比,Morphine组培养基中IL-1β蛋白显著增加（P<0.05）;与Morphine组相比,MT组培养基中IL-1β蛋白显著增加（P<0.05）;动物实验中,相比于Control组,M组大鼠PWT值显著下调（P<0.05）;与M组相比,PWT值在M+MORTM1-TAT组,在给MORTM1-TAT后15min、30min、60min、90min和120min的显著上调（P<0.05）,提示提高吗啡耐受反应大鼠痛觉阈值可通过鞘內注射MORTM1-TAT实现;用免疫蛋白印记检测大鼠脊髓CD86和P2X4R的表达水平,结果显示,与Control组相比,M组大鼠脊髓中CD86和P2X4R表达均明显上升（P<0.05）;与M组相比,CD86和P2X4R表达在M+MORTM1-TAT组大鼠的下降水平差异有统计学意义（P<0.05）,提示MORTM1-TAT的作用可能是通过减少P2X4R的表达量,抑制促炎M1型激活状态小胶质细胞介导的。结论:吗啡孵育能够导致μ/δ阿片受体异聚体增多促进小胶质细胞促炎M1型活化,干扰μ/δ阿片受体异聚体能抑制吗啡导致的小胶质细胞促炎型活化及吗啡耐受反应,其机制可能是μ/δ阿片受体异聚体减少导致小胶质细胞中P2X4R的表达降低,抑制小胶质细胞的促炎性激活和促炎细胞因子IL-1β的释放。