【摘 要】
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本文以虾夷扇贝肌球蛋白为原料筛选新的血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,通过体外及体内实验对其活性进行验证,借助代谢组学与蛋白质组学技术探究其对原发性高血压大鼠(spontaneously hypertension rats,SHR)血清代谢组和蛋白质组的影响,阐释其体内作用机制。借助在线酶切工具,采用胃肠道蛋白酶对虾夷扇贝肌球蛋白进行模拟
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本文以虾夷扇贝肌球蛋白为原料筛选新的血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,通过体外及体内实验对其活性进行验证,借助代谢组学与蛋白质组学技术探究其对原发性高血压大鼠(spontaneously hypertension rats,SHR)血清代谢组和蛋白质组的影响,阐释其体内作用机制。借助在线酶切工具,采用胃肠道蛋白酶对虾夷扇贝肌球蛋白进行模拟酶切,以ACE为靶标,通过分子对接筛选出能够与ACE紧密结合的肽,并通过RP-HPLC法对其体外活性进行验证,得到一条新的ACE抑制肽NCW,IC50值为35.50±1.23μmol/L;基于SHR模型,通过检测大鼠收缩压(systolic blood pressure,SBP)和舒张压(diastolic blood pressure,DBP)对其体内活性进行评价,灌胃肽NCW三周后,SHR大鼠的SBP与DBP显著降低了48.09±3.84与41.63±2.39 mmHg,表明肽NCW具有体内降压效果;基于LC-Q-TOF-MS的代谢组技术分析鉴定了肽NCW对SHR大鼠血清代谢物的影响,共鉴定得到61个已知差异代谢物,KEGG通路富集分析表明差异代谢物主要涉及胆汁酸生物合成、胆汁分泌、胆固醇代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解及叶酸生物合成途径;基于蛋白质组学研究方法,以TMT技术为基础,联合LC-Q-TOF-MS质谱分析了肽NCW对SHR大鼠血清蛋白质的影响,共鉴定得到136个差异蛋白,差异蛋白主要参与了心肌细胞肾上腺素能信号传导、氨基酸生物合成、心肌收缩、碳代谢、丙酮酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、柠檬酸盐循环、胰高血糖素信号通路和雌激素信号通路。
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