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目的:评价针药结合治疗反复移植失败的临床疗效,探讨中药(温肾活血方)及电针对胚胎着床障碍大鼠子宫内膜蜕膜化的作用机制,为临床治疗RIF提供新的靶点及思路。方法:临床研究:采用完全随机对照研究设计,纳入拟行冻胚移植的肾虚血瘀型RIF患者160例,按入组顺序随机分为中药组、电针组、针药结合组、对照组。各组在常规内膜准备与黄体支持的基础上分别予中药温肾活血方、电针、温肾活血方+电针。治疗1个周期后比较四组妊娠结局;B超监测子宫内膜厚度、类型及内膜下血流信号;记录治疗前后中医证候评分及生殖质量评分,评价治疗前后肝、肾功能。实验研究:采用性成熟雌性SD大鼠,随机分为中药组(C)、电针组(A)、针药组(CA)、黄体酮组(P)、模型组(M)、正常组(N)。于妊娠第1日(PD1)起至妊娠第8日(PD8),中药组予温肾活血方煎剂灌胃,电针组予针刺关元、三阴交,针药组予中药+电针治疗,黄体酮组肌肉注射黄体酮,模型组、正常组大鼠灌胃生理盐水。PD3上午8时,除正常组外其余各组大鼠灌服米非司酮混悬液造模。PD8下午4时麻醉后进行取材,计数各组大鼠着床位点数;HE染色法观察子宫内膜组织形态改变;免疫组化法检测子宫中Vimentin、E-cadherin表达;ELISA法检测子宫内膜组织匀浆中PRL、IGFBP-1含量,RT-PCR法检测妊娠大鼠子宫内膜中Ihh、Ptch1、Smo、BMP2、Id1、β-catenin mRNA相对的表达。结果:临床研究:(1)妊娠结局比较:针药组临床妊娠率高于对照组(p<0.05),各组生化妊娠率比较无差异(p>0.05),中药组、针药组流产率均低于对照组(p<0.05),≤35岁中药组、针药组患者临床妊娠率高于对照组(p<0.05)。≤35岁针药组患者生化妊娠率高于对照组(p<0.05)。(2)超声下子宫内膜形态学比较:治疗后子宫内膜厚度针药组最高(p<0.05),对照组最低(p<0.05),中药组、电针组比较无统计学差异(p>0.05),内膜转化日针药组、中药组A型内膜占比与对照组比较有显著性差异(p<0.05)。(3)子宫内膜血流比较:治疗后中药组、电针组、针药组内膜下血管支数增加(p<0.05),RI、PI均较对照组降低(p<0.05)。其中,针药组治疗后内膜下血流更丰富(p<0.05)。(4)血清性激素比较:治疗前各组卵泡期FSH、LH、E2、P比较无统计学差异(p>0.05),治疗后内膜转化日各组患者血清E2、P值比较无显著性差异(p>0.05)。(5)临床症状积分比较:治疗前各组患者生殖质量评分、中医证候积分比较无统计学意义(p>0.05),治疗后各组生殖质量评分升高,中医证候积分降低。治疗前后积分差值比较针药组>中药组、电针组>对照组,存在统计学差异(p<0.05)。实验研究:(1)妊娠率及着床位点数:各组妊娠率无差别(p>0.05)。着床位点数比较结果C组、A组均高于M组(p<0.05),且低于N组(p<0.05),CA组与N组接近,且明显高于M组、P组(p<0.05),P组着床数与M组无显著性差异(p>0.05)。(2)子宫内膜组织形态:M组蜕膜化缺失,N蜕膜化完整,C组、CA组、A组、P组均有不同程度的子宫内膜蜕膜化,CA组与N组接近。(3)蜕膜细胞分化程度:M组与N组比较Vimentin表达升高,E-cadherin表达降低(p<0.05),与M组比较,CA组、C组、A组中Vimentin阳性面积减少(p<0.05),E-cadherin阳性面积增多(p<0.05);与P组比较,CA组、C组中Vimentin表达下调(p<0.05)、E-cadherin表达上调(p<0.05),A组仅Vimentin表达下调(p<0.05)。(4)子宫内膜蜕膜化程度:N组子宫组织中PRL、IGFBP-1水平最高(p<0.05),M组最低(p<0.05)。不同治疗组间比较PRL、IGFBP-1表达量结果CA组>C组、A组>P组(p<0.05)。(5)IHH/Ptch1/Smo/BMP2信号通路影响:M组与N组比较,Ihh、Smo、BMP2mRNA相对表达量均下调(p<0.05),与M组比较,C组、CA组大鼠子宫中Ihh、Smo、BMP2 mRNA相对表达量均升高(p<0.05),且Ptch1 mRNA相对表达量降低(p<0.05)。与P组比较,CA组大鼠子宫中Ihh、Smo、BMP2 mRNA相对表达量均显著上调(p<0.05),Ptch1 mRNA相对表达量显著下调(p<0.05)。(6)BMP2下游蛋白Id1、β-catenin表达:M组与N组比较,Id1、β-catenin mRNA表达下降(p<0.05),与M组比较,C组、CA组Id1、β-catenin mRNA表达量均上调(p<0.05),与P组比较,C组、CA组Id1、β-catenin mRNA表达量均上调(p<0.05),与N组比较,C组、CA组Id1、β-catenin mRNA表达量无统计学差异(p<0.05)。结论:(1)针药结合可提高RIF患者临床妊娠率,降低流产率。(2)针药结合可优化子宫内膜厚度、形态,改善子宫内膜血供,提高生殖质量、减轻肾虚血瘀症状且安全性良好。(3)米非司酮造模形成的着床障碍模型存在子宫内膜蜕膜化缺陷。(4)针药结合可影响Ihh/Ptch1/Smo/BMP2信号通路,上调BMP2蛋白表达,可能启动子宫基质细胞MET,使子宫内膜广泛蜕膜化,有利于胚胎植入。