目的:在治疗慢性乙型肝炎的新策略中,靶向核衣壳的形成颇有吸引力。目前靶向核衣壳的药物主要是针对HBV核心蛋白二聚体多聚化的过程,而靶向HBV核心蛋白单体形成二聚体这一过程的药物较为缺乏。前期我们利用分段荧光素酶互补技术,构建了一种靶向核心蛋白二聚体形成的药物筛选细胞模型SRluc-HBc6,本研究利用该模型从包含3884种分子的化合物库中,筛选干扰乙肝病毒核心蛋白二聚体形成的药物。方法:利用课题组前期构建的SRluc-HBc6药物筛选模型,从包含3884种分子的化合物库中,初筛能影响HBV核心蛋白二聚体形成的药物;利用SRluc-HBc6细胞模型对初筛药物进行量效关系评价,选择剂量依赖效果显著的药物作进一步鉴定;利用Southern blot方法评价待选药物对HBV DNA复制的影响;利用转染了质粒Rluc N-L-C的HEK293细胞,进行量效关系实验以排除假阳性结果;利用颗粒凝胶电泳分析法评价候选药物对HBV核衣壳形成的影响;利用Western blot方法评价候选药物对HBV核心蛋白表达的影响;利用热转变分析法和热位移法评价候选药物与HBV核心蛋白之间的相互作用。结果:在第一轮初筛的3884种化合物中,使Rluc活性降低了两倍及两倍以上的化合物有223种;在第二轮筛选中有22种化合物表现出明显的剂量依赖效应;在第三轮筛选中共有6种药物能显著抑制HBV DNA复制;颗粒凝胶电泳分析和Western blot结果显示苯丁酸氮芥和CCT128930可以显著影响HBV核衣壳形成和核心蛋白表达。结论:我们包含3884种分子的化合物库中筛选出两种药物,即苯丁酸氮芥和CCT128930。两者均可通过抑制HBV核心蛋白二聚体的形成,进而抑制HBV DNA的复制。