红色原鸡IFN-γ启动子多态性及MHC单倍型对禽流感免疫效果的影响

来源 :云南农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:jxhxf0
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H5N1血清亚型禽流感病毒引起的高致病性禽流感(HPAI)是具有畜牧业经济价值和全球公共卫生意义的重要传染病。迄今防控该病的策略主要有疫苗接种健康动物与扑杀染疫动物两种主要方式,前者不适用于候鸟并且无法应对新的病毒变异株,后者经济成本高昂。针对能代表机体细胞免疫水平的广谱抗病毒细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和迄今公认具有高度等位基因多态性的疾病抗性基因群主要组织相容复合体(MHC),本研究以文献报道HPAI抗病力较强的红色原鸡(Gallus gallus)为实验动物,接种H5N1高致病性禽流感灭活疫苗,采用病毒血凝抑制(HI)试验检测血清抗体效价,通过PCR+1扩增IFN-γ启动子序列,再经克隆及测序确定其单核苷酸多态性(SNP)位点、数量、类型及频率,同时采用常规PCR扩增MHC-BL区域内的微卫星序列LEI0258与MCW0371以确定MHC单倍型。应用Pearson卡方检验分析IFN-γ启动子SNP等位基因分布是否处于Hardy-Weinberg平衡,随后采用普通线性模型(GLM)对特定SNP基因型频率与抗体效价的相关性进行最小二乘分析。应用单因素方差分析检查MHC单倍型与抗体效价是否存在关联性。结果发现,红色原鸡IFN-γ启动子区域共有33个SNP位点,其中-316A/G SNP基因型随着A取代G呈现抗体效价逐渐增高的趋势,其中AA型(n=32)抗体效价(8.00±0.252log2)显著高于GG型(n=7)抗体效价(6.57±0.539log2)(P<0.05),但AG型(n=23)抗体效价(7.74±0.298log2)与上述两个基因型抗体效价差异均不显著。扩增MHC微卫星序列LEI0258检测到30个等位基因(介于182~552bp)和36个基因型,其中B4(16/58)、B14(10/58)、B18(15/58)、B12.3(7/58)为优势单倍型;测序微卫星LEI0258发现包含(AAGGAAAGAAAG)n、(TGTAGTACGTG)n、(GGGA ATTCCCTTACC)n、(CCTTCTTTCTTT)n、(TG)n、(CAAAAAAATCACCACAAAATGAGCCTGAATGTTT GCACTGAGGATGGAGCACAGCTCA)n六种基本重复单位及其组合,MCW0371含有连续且数量不等的(T)n、(G)n、(C)n或(A)n及其组合。优势MHC单倍型均显示较高的抗体效价,但各单倍型及基因型组间抗体效价差异不显著。本研究结果表明所选取的两类基因都有丰富的多态性,其中IFN-γ-316A/G SNP基因型与HPAIV特异性抗体水平存在关联性,提示A等位基因携带个体可能具有较强的HPAI抗病力,但因相同MHC基因型的样本数偏少,未能体现出优势MHC单倍型可作为抗HPAI遗传标记的潜力。
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