cyclin G1调控乳腺癌干细胞影响乳腺癌生物学行为的实验研究

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目的:明确细胞周期素G1(cyclin G1)在乳腺癌发生发展中的生物学作用,及其对乳腺癌细胞干细胞的影响,进而探究cyclin G1是否通过调控乳腺癌干细胞影响乳腺癌的恶性生物学行为。方法:应用大肠杆菌感受态JM109进行分子克隆实验,转化并抽提质粒DNA分子GFP和Cyclin G1,并利用PEI转染法将质粒DNA分子分别转染到乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中;应用Western-blot以及real-time PCR法检测乳腺癌细胞中cyclin G1蛋白水平和基因水平的表达变化;运用细胞划痕实验、Transwell实验以及流式细胞术检测凋亡实验探索cyclin G1对乳腺癌细胞的侵袭转移、化疗耐药等恶性生物学行为的影响,进行肿瘤细胞Spheroid成球实验、Realtime PCR实验,检测在cyclin G1分子过表达条件下对乳腺癌细胞的干性表型的调控,深入探讨cyclin G1是否通过调控乳腺癌干细胞进而影响乳腺癌的侵袭转移及化疗耐药等。结果:1.成功转化并抽提出GFP、cyclin G1质粒的环状DNA分子。2.cyclin G1分子促进了乳腺癌细胞侵袭转移和化疗耐药等恶性生物学行为。3.cyclin G1促进了乳腺癌细胞干性细胞群的富集及自我更新,且cyclin G1表达增加促进了乳腺癌细胞干性相关基因CD133、CD90、Nanog、Bmi-1、ABCG2、KLF-4、Oct4的表达增加,差异有统计学意义。结论:1.cyclin G1分子参与了乳腺癌细胞侵袭转移、化疗药物抵抗等恶性生物学行为。2.cyclin G1分子介导了乳腺癌细胞自我更新能力的维持及干性调控。3.cyclin G1分子高表达的乳腺癌细胞系中干性相关基因表达增加,且其表达水平与乳腺癌细胞复发转移和化疗抵抗等恶性生物学行为密切相关。4.综上所述,cyclin G1可能通过调控乳腺癌干细胞进而影响乳腺癌侵袭转移、化疗耐药等恶性生物学行为。
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