叶下珠对鱼类肝损伤保护机理的研究

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本研究选用罗非鱼做试验动物,探讨叶下珠对鱼类肝损伤的保护机理。研究主要分以下几部分。1叶下珠不同提取物中没食子酸含量的测定目的:为研究叶下珠不同提取物中没食子酸含量的测定方法。方法:应用水提、醇提、酮提三种方法提取叶下珠,采用反向高效液相技术(RP-HPLC)测定其提取物中没食子酸的含量。结果:叶下珠不同提取物中,水提物中没食子酸的含量最高,为9.473 mg·g-1。2叶下珠保肝物质提取工艺的优化目的:对叶下珠保肝物质提取工艺进行优化。方法:选定水提、醇提、酮提三种不同提取方法,以没食子酸含量为指标结合叶下珠对转氨酶的影响,筛选确定提取方法。在此基础上,选择提取温度、提取时间、料液比、提取次数作为主要影响因素,在单因素试验基础上进行三因素三水平的正交试验优化提取保肝物质工艺条件。结果:水提法是最佳提取方法。影响没食子酸得率的因素先后顺序为:提取温度、提取时间、料液比和提取次数。最优工艺条件为:浸提时间45 min、提取温度为100℃、料液比为1/30。3叶下珠对鱼类肝损伤及免疫功能的影响目的:为研究叶下珠对鱼类肝损伤及免疫功能的影响。方法:在罗非鱼基础饲料的基础上添加叶下珠水提物0.5%、1.0%、1.5%连续饲喂7 d,CuSO4·5H2O中毒造模、采血,检测鱼血清中的肝损伤指标(ALT、AST、ADA、LDH)和免疫指标(AKP、ACP、MPO、溶菌酶)。结果:各添加组的肝损伤指标、免疫指标与对照组相比,差异极显著(P<0.01),而各添加组间的差异不显著(P>0.05)。结论:在罗非鱼饲料中添加0.5%~1.5%的叶下珠可明显抑制罗非鱼肝损伤,增强罗非鱼的免疫性能。4叶下珠对鱼类肝脏抗氧化性能及细胞膜功能的影响目的:为研究叶下珠对鱼类肝脏抗氧化性能及细胞膜功能的影响。方法:在罗非鱼基础饲料的基础上添加叶下珠水提物0.5%、1.0%、1.5%连续饲喂7 d,CuSO4·5H2O中毒造模、采样,检测罗非鱼肝脏中的抗氧化指标(CAT、SOD、T-AOC、MDA)和细胞膜功能指标(GSH-PX和Na+K+-ATPase),同时观察肝脏的组织学变化。结果:各添加组的抗氧化指标和细胞膜功能指标与对照组相比,差异极显著(P<0.01),而各添加组间的差异不显著(P>0.05)。组织病理学显示,给药组鱼肝细胞变性、坏死程度明显轻于造模组,其中以高剂量组效果最好。结论:在罗非鱼饲料中添加0.5%~1.5%的叶下珠可明显提高机体的抗氧化能力,增强肝细胞的膜功能。5叶下珠对肝细胞损伤的影响目的:为研究叶下珠对肝细胞损伤的保护机理。方法:通过细胞分离、培养,单细胞电泳等技术,观察其对罗非鱼肝细胞P450含量、NO含量、DNA损伤的影响。结果:叶下珠添加组的肝细胞P450含量、NO含量、细胞“彗尾”出现率和总彗星长度与对照组相比,差异极显著(P<0.01),而各添加组间的差异不显著(P>0.05)。结论:叶下珠具有明显保护肝细胞的作用。
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