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目的:前期研究发现具有中度成瘤性的人胚肾细胞(Human Embryonic Kidney293cell, HEK293细胞)在静息状态下就存在NFATs的活化,且外源导入CHP2基因可通过促进HEK293细胞中活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFATs)的活化及内皮素1(endothelin1, ET1)的表达,促进肿瘤细胞的生长。本研究旨在分析不同癌细胞株中NFATs及ET1的表达差异,阐明与肺癌细胞A549增殖和迁移相关的NFATs亚型的种类及其组成性活化状态,并探讨NFATs组成型活化促肺癌细胞增殖和迁移的机制。这方面的研究将有助于深化我们对CaN-NFATc1-ET1通路在肿瘤发生发展中作用的认识,为抗肿瘤药物的研究提供新的作用靶点。方法:1.通过生物信息学技术,分析不同癌细胞株中NFATs及ET1的表达差异。2.通过逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcriotion-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白印迹(Western-blot)技术检测多种非小细胞肺癌细胞(H23、H1299和A549)和正常人支气管上皮细胞(HBE)中NFATs及ET1的mRNA和蛋白表达水平,同时应用核浆分离和免疫荧光技术确定肺癌细胞A549及HBE细胞中NFATs的核、浆分布情况;3.采用细胞计数和细胞增殖—毒性检测方法来比较肺癌细胞A549及HBE细胞的增殖差别;4.分别借助划痕实验和软琼脂实验观察细胞的迁移和集落形成情况,以判断肺癌细胞A549及HBE细胞的侵袭能力;5.应用单细胞克隆实验,验证肺癌细胞A549和HBE细胞的成瘤能力;6.使用CaN-NFATs通路阻断剂CsA阻断钙调磷酸酶(CaN)的活性,观察其对肺癌细胞A549及HBE细胞的影响(包括NFATs和ET-1的表达水平以及细胞增殖情况)。结果:1. NFATc1-NFATc4和ET1在不同癌细胞株中有表达,但不同癌细胞株中表达水平不一。NFATc1,NFATc3和ET1存在不同癌细胞株中的显著表达差异;2.肺癌细胞A549中NFATc1和NFATc3的mRNA和蛋白表达水平显著性高于HBE细胞,其NFATc1及NFATc3表达量分别约为HBE细胞的2和4倍;且ET1基因特异性高表达于A549细胞中;而在肺癌细胞H23和H1299中未见以上差异;3.肺癌细胞A549中NFATc1的组成性活化程度高于HBE细胞;4. A549细胞的增殖能力强于HBE细胞,培养72小时可见2倍以上差异;但是HBE细胞的迁移速度明显高于A549细胞,培养24小时呈现显著性差异;5. A549细胞具备明显的集落形成能力和单细胞克隆扩增聚团能力,而在HBE细胞中未见以上现象;6.应用环孢霉素阻断钙调磷酸酶(CaN)的活性,可能通过抑制NFATc1的组成型活化来降低ET1的表达,从而抑制A549细胞的增殖;结论:NFATc1-NFATc4和ET1基因在不同肿瘤细胞中表达程度不同;NFATs的组成型活化可促进肺癌细胞A549的增殖;CaN-NFATc1-ET1通路的激活可促进肺癌细胞A549的增殖。