目的结核性脑膜炎(tuberculous meningitis，TM)是小儿时期一种严重的中枢神经系统感染性疾病。其病死率为20％～50％，幸存者中有20％～30％留有永久性神经系统后遗症。TM发病机制尚不完全清楚，诊断困难，预后较差。蛋白质组学技术是近年来出现的一种研究特定细胞、组织或完整生物体所表达的全部蛋白质及其活动规律的新兴学科。本实验通过该技术建立正常中国儿童及TM患儿脑脊液(cerebrospinal fluid，CSF)蛋白质双向凝胶电泳图谱，筛选TM特异性蛋白，为TM的早期诊断提供线索，同时也为其发病机制的深入了解提供新思路。方法收集TM急性期、TM治疗1个月后及正常对照组儿童CSF各5ml，三氯乙酸(trichloracetic acid，TCA)沉淀法获取CSF总蛋白质，固相PH梯度(immobile PH gradient，IPG)二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis，2D-PAGE)技术分离蛋白质，考马斯亮蓝染色，Imagescanner扫描仪以及LabScan扫描软件对凝胶进行扫描获取图像。利用图像分析软件PDQuest 7.0，以正常儿童CSF的2-DE凝胶为参考胶，将TM急性期CSF的凝胶与之进行比较分析，寻找两组CSF蛋白质谱的异常变化斑点。再以TM急性期CSF凝胶为参考胶，将TM治疗1个月后CSF凝胶与之比较分析，观察差异蛋白质斑点的变化情况。筛选出分辨清楚、仅在TM急性期CSF中表达的蛋白质斑点，切取后进行基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption／ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)分析，获得肽质量指纹图谱(Peptide mass fingerprinting，PMF)，运用生物信息学技术获取蛋白的基本信息，确定差异蛋白质。结果正常儿童CSF分离获得蛋白质斑点533个，TM急性期CSF分离获得蛋白质斑点546个，其中有14个蛋白质点仅在正常CSF表达，27个蛋白质点仅在TM急性期CSF中表达，在TM急性期高丰度表达的蛋白质点，在TM治疗1个月后CSF中表达量均下调与正常CSF蛋白质点表达量比较，TM急性期有15个蛋白质点表达量有2倍以上的上调，而8个蛋白质点表达量有2倍以上的下调。共选出20个差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS分析，获得了20张PMF。进入数据库进行搜索后匹配到蛋白质的点有16个，发现载脂蛋白A-I、免疫球蛋白J链、人多克隆免疫球蛋白M冷凝集素Fab片段、免疫球蛋白λ轻链VLJ区、MGC31936蛋白、免疫球蛋白λ轻链可变区、抗肿瘤坏死因子α抗体、免疫球蛋白G1 A链Fab片段、免疫球蛋白KC、HLA-Ⅱ类抗原DRB1-4、PRO2675蛋白、MRP14蛋白在TM急性期CSF中特异性表达。结论本实验首次成功建立了正常儿童CSF与TM患儿CSF的双向凝胶电泳图谱。通过凝胶图像分析和计算机信息处理，发现了一些与TM相关的蛋白质差异位点。经质谱分析及生物信息学技术初步鉴定了部分差异蛋白质，发现载脂蛋白A-I、抗肿瘤坏死因子α抗体、HLA-Ⅱ类抗原DRB1-4、MRP14蛋白可能与TM的发生发展密切相关，这些蛋白能否成为TM诊断的标记物，值得进一步的研究。