【摘 要】
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意大利蜜蜂是蜜蜂的一种,在分类学上属动物界、节肢动物门、昆虫纲、膜翅目、蜜蜂总科、蜜蜂科。意大利蜜蜂(意蜂)是世界上分布最广且被大量利用的西方蜜蜂。蜂毒是存在于蜜
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意大利蜜蜂是蜜蜂的一种,在分类学上属动物界、节肢动物门、昆虫纲、膜翅目、蜜蜂总科、蜜蜂科。意大利蜜蜂(意蜂)是世界上分布最广且被大量利用的西方蜜蜂。蜂毒是存在于蜜蜂毒囊内的透明液体,科学家发现包含多种有活性的物质,包括蜂毒肽、蜂毒明肽和透明质酸酶等。本研究工作中,为了探究意蜂毒的物质成分及其生物化学性质,我们收集意蜂毒液,在粗毒水平检测了意蜂毒对白血病细胞K562的毒害作用,发现对K562细胞的IC50是5.49 μg/mL。随后我们用倒置显微镜检测了细胞形态学的变化,发现5 μg/mL的蜂毒使细胞膜受损伤,细胞边缘模糊,而在10μg/mL的浓度下蜂毒完全破坏了癌细胞的细胞膜,细胞完全死亡。为了探究蜂毒里是否含有作用于离子通道的成分,本研究采用反相高效液相色谱对意蜂毒素进行分离纯化,共收集到20个峰,分别收集,真空冻干。随后对每个组分进行了电生理检测,发现滞留时间在8min的成分可以完全抑制ND7/23细胞表达的钠通道电流。ND7/23细胞可以表达几种不同的钠电流,为了进一步研究毒素的选择性,将Nav1.3、Nav1.4、Nav1.5 和 Nav1.7 通过 HEK293T 细胞异源表达,将Nav1.8通过ND7/23细胞异源表达。结果表明发现它完全抑制Nav1.3、Nav1.4钠电流,抑制60%的Nav1.5电流,抑制52%的Nav1.7电流,抑制93%的Nav1.8电流,结果表明毒素对离子通道有一定的选择性。Lycosin-Ⅰ是本实验室发现的一种抗菌药物,对多种临床致病菌株都有很好的抑制作用,为了进一步提高Lycosin-I的抗菌活性,本实验室对Lycosin-Ⅰ进行了分子改造,在其氨基端偶联一个葡萄糖分子,即 Glu-Lycosin-Ⅰ。随后检测了 野生型 Lycosin-Ⅰ 与 Glu-Lycosin-Ⅰ 的抗菌活性,我们发现改造后的Glu-Lycosin-Ⅰ对几种临床致病菌的抑制弱于野生型Lycosin-Ⅰ,因此在后续的实验中我们会尝试将不同的分子与Lycosin-Ⅰ偶联,使之成为更好的抑菌药物。
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