子宫内膜异位症和子宫腺肌病患者差异蛋白组学的研究

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目的:  筛选子宫内膜异位症和子宫腺肌病与健康对照组之间的血清差异表达蛋白,为发现子宫内膜异位症和子宫腺肌病早期诊断的生物标志物提供方向,并探索这两种疾病的发病机制,试图寻找子宫内膜异位症和子宫腺肌病之间的相互关系。  方法:  临床收集典型的子宫内膜异位症和子宫腺肌病患者以及健康对照组血清各20例,分别制成混合样本,提取蛋白,并去除高丰度蛋白,进行蛋白变性,还原及酶解,利用iTRAQ标记技术及TripleTOF5600系统进行蛋白图谱的绘制及采集,并用ProteinPilotSoftwarev.4.0以及ParagonandProgroupAlgorithm进行运算分析,得到各组之间的血清差异表达蛋白。对这些差异蛋白进行功能注释及生物信息分析。并从中选择明显相关的蛋白,利用Western-blot进行验证。  结果:  1.从60例血清中共检测到1660个独立的肽段,共鉴定到蛋白184个,达到定量标准的蛋白数是182个。  2.与健康对照组相比,29个蛋白在子宫内膜异位症患者的血清中有明显差异表达(>1.5倍,或<0.66倍),25个蛋白表达明显升高,4个蛋白表达明显降低。其中差别达到2倍以上的蛋白共22个,20个上调蛋白,2个下调蛋白。  3.与健康对照组相比,25个蛋白在腺肌病患者的血清中有明显差异表达(>1.5倍,或<0.66倍),21个蛋白表达明显升高,4个蛋白表达明显降低。其中差别达到2倍以上的蛋白共19个,16个上调蛋白,3个下调蛋白。  4.有9个蛋白在腺肌病患者的血清中的表达明显高于内异症组(>1.3倍),而同时有5个蛋白在腺肌病组的表达明显低于内异症组(<0.66倍)。  5.我们选取CD44,fibronectionisoform1,complementfactorB,serumalbumin,alphalAntitrypsin这五个抗体,在子宫内膜异位症组腺肌病组及对照组的血清中进行western-blot验证。结果与我们之前iTRAQ的结果相符,从而证实了我们实验的可靠性。  结论:  本实验首次将定量蛋白质组学iTRAQ技术应用于子宫内膜异位症和子宫腺肌病的血清差异蛋白检测中,iTRAQ技术与传统蛋白质组学技术相互呼应,具有较高的重复性及准确性,利于生物标志物的筛选。子宫内膜异位症患者血清中CD44,纤维蛋白原-α,纤连蛋白1(fibronectin-1)具有明显高表达,它们均参与子宫内膜异位症的粘附机制。而子宫腺肌病患者血清中纤维蛋白原的含量明显高于内异症组和对照组,这提示子宫腺肌病患者的血液处于高凝状态,而内异症患者却非如此。同样,子宫腺肌病和内异症患者血清补体系统的差异表达,很有可能与这两种疾病在这些生物活性方面的差异有关。
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