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目的:探讨1mTOR信号通路蛋白p-mTOR.p-p70S6K及相关蛋白p53、PTEN在膀胱尿路上皮癌中的表达情况,为mTOR抑制剂应用于膀胱肿瘤的治疗提供理论依据;探讨(?)mTOR抑制剂CCI-779对膀胱癌T24、BIU-87细胞的作用,为CCI-779治疗膀胱癌提供实验依据;探讨CCI-779对DDP治疗膀胱癌的化疗增敏作用及机制。方法:免疫组化结合组织芯片技术检测201例膀胱尿路上皮癌和40例正常膀胱粘膜组织中mTOR通路蛋白p-mTOR、p-p70S6K和相关蛋白P53、PTEN的表达情况,探讨mTOR通路在膀胱癌发生、发展、复发、预后中的作用;MTT法检测CCI-779对膀胱癌T24、BIU-87细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测CCI-779对膀胱癌T24、BIU-87迁移能力的影响;流式细胞技术检测不同浓度CCI-779对T24、BIU-87细胞周期和凋亡的影响;Transwell细胞侵袭实验检测不同浓度CCI-779对T24、BIU-87侵袭能力的影响;Western Blot法检测不同浓度CCI-779作用后mTOR、p70S6K磷酸化情况;进行体内实验检测CCI-779对裸鼠移植瘤的抑制作用。MTT法比较CCI-779、DDP、CCI-779联合DDP对膀胱癌T24细胞的作用,评价CCI-779与DDP的协同作用;进行体内实验,比较CCI-779对DDP治疗裸鼠移植瘤的增敏效果,免疫组织化学法检测移植瘤Ki-67的表达情况,TUNEL检测移植瘤凋亡情况;通过Western Blot法检测移植瘤中mTOR及细胞周期蛋白p2l表达情况,探讨其协同作用的机制。结果:p53与PTEN无明显的相关性,p53、PTEN通过不同的通路激活mTOR/p70S6K信号通路,mTOR/p70S6K通路是其共同的下游通路;p-mTOR、 p-p70S6K在膀胱尿路上皮癌中阳性表达明显高于正常组织,表明mTOR/p70S6K通路的激活可能与膀胱尿路上皮癌的发生有关;同时,p-mTOR、p-p70S6K的表达增加与肿瘤分级分期的增加及肿瘤多发呈正相关,提示mTOR/p70S6K通路的激活促进肿瘤进展;在与肿瘤无病生存率的研究中发现,p-mTOR、p-p70S6K阳性者肿瘤无病生存的时间明显缩短,多因素分析结果显示,p-mTOR阳性表达与肿瘤分级分期一样,是膀胱癌无病生存的独立的预后因素;mTOR通路的激活可以作为应用mTOR抑制剂治疗的依据,与p53和PTEN的表达状态无关。CCI-779能够明显抑制T24、BIU-87细胞的增殖,呈现浓度依赖性和时间依赖性;与空白对照组相比,CCI-779使膀胱癌细胞迁移能力明显降低(P<0.01)。CCI-779导致膀胱癌细胞周期阻滞于Go/G1期,不导致细胞凋亡;CCI-779能够抑制膀胱癌细胞浸润能力;CCI-779能够抑制mTOR磷酸化,进而抑制p70S6K磷酸化。CCI-779能够抑制裸鼠移植瘤生长,抑制裸鼠移植瘤生长的作用是通过抑制肿瘤细胞增殖而不是通过诱导细胞凋亡实现的。体外实验中,CCI-779与DDP联合应用,能够明显的增加对T24细胞的抑制作用,二者联合具有明显的协同效应。体内实验中,联合用药组肿瘤重量较CCI-779、DDP单独治疗组、对照组明显下降(p<0.05);联合用药组凋亡率明显高于其他组(p<0.05);联合组Ki-67表达水平明显低于单一用药组和空白对照组(p<0.05)。结论:mTOR信号通路在膀胱癌中广泛被激活,与膀胱尿路上皮癌的发生、发展、肿瘤数目、复发有关,mTOR通路的激活是选择mTOR抑制剂的指标,不需考虑p53和PTEN的表达状态;CCI-779对膀胱癌T24、BIU-87细胞具有明显的抑制作用,是治疗膀胱癌较有前景的药物;CCI-779与DDP联合应用,能够增加DDP对膀胱癌T24细胞的治疗作用,二者起协同作用;CCI-779与DDP联合应用,能够增加裸鼠移植瘤对DDP化疗敏感性,其机制是通过mTOR抑制剂对细胞周期蛋白p2l的抑制作用实现的。