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全文分为三章:一、肝细胞癌TIMP-3蛋白与mRNA表达的检测;该研究共收集20例HCC患者标本,每例分别切取母瘤(原发瘤)组织、转移瘤组织及肿瘤旁肝组织各一份.采用蛋白免疫印迹和RT-PCR法检测TIMP-3蛋白与mRNA的表达情况,对结果进行半定量分析. 二、肝细胞癌TIMP-3启动子甲基化的检测; 采用甲基化特异的PCR(MSP)方法检测20例HCC患者标本TIMP-3基因启动子甲基化的情况,结果显示原发瘤中有7例出现TIMP-3启动子甲基化扩增,甲基化阳性率为35﹪.转移瘤中有9例出现TIMP-3启动子甲基化扩增,甲基化阳性率为45﹪.肿瘤旁肝组织均未发现TIMP-3启动子甲基化扩增.在所有有甲基化的HCC组织,包括原发瘤和转移瘤,有62.5﹪的病例TIMP-3 mRNA和蛋白表达完全丢失,31.3﹪表达降低.TIMP-3启动子甲基化扩增和其mRNA和蛋白表达之间具有统计学意义的相关关系(p<0.01).在未检测到甲基化扩增的组织中,有1例TIMP-3 mRNA和蛋白表达完全丢失,1例表达降低.三、5AZa-dc逆转肝细胞癌TIMP-3启动子甲基化;将MSP方法检测出的TIMP-3启动子甲基化扩增阳性的HCC组织进行细胞分离培养并传代,成功培养和建立了1例转移瘤细胞系,命名为H2M.另在该室冻存的肝癌细胞中,用MSP检测出A431存在甲基化扩增.综上所述,我们得出结论如下:1)TIMP-3蛋白和mRNA在HCC中表达减少或完全丢失,可能是HCC发生和转移进程的重要原因之一;2)HCC中TIMP-3 mRNA和蛋白的表达一致,表明TIMP-3蛋白失活不是由于转录后机制造成的;3)HCC中存在TIMP-3基因启动子CpG岛的甲基化扩增,而且是肿瘤特异的;4)TIMP-3基因启动子CpG岛的甲基化是导致TIMP-3基因失活、蛋白缺如的重要机制,也是肿瘤转移进程的重要原因之一;5)5Aza-dc可以降低HCC细胞的细胞-基质粘附以及侵袭和运动能力;6)5Aza-dc可以逆转TIMP-3启动子的甲基化状态,使TIMP-3基因得以开放,mRNA和蛋白得以重新表达,从而恢复其抑制肿瘤的能力.